公开(公告)号
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CN1432408A
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公开(公告)日
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2003.07.30
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申请(专利)号
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CN02102302.6
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申请日期
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2002.01.15
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专利名称
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牛乳腺炎疫苗的制备方法
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主分类号
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A61K39/02
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分类号
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A61K39/02;A61K39/108;A61P31/04
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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恒信环球农业科技有限公司
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发明(设计)人
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詹古拉
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地址
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美国加利福尼亚洲
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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北京集佳专利商标事务所
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代理人
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王学强
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国省代码
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美国;US
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主权项
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一种制备牛乳腺炎疫苗的方法,包括如下步骤:a.提取含有蔗糖-6果糖转移酶(sacB)基因的质粒;b.制备革兰氏阴性菌感受态细胞;c.转化步骤a中提取含有的蔗糖-6果糖转移酶(sacB)基因的质粒进入步骤b所制备的革兰氏阴性菌感受态细胞中;d.鉴定,获得转化的革兰氏阴性菌;e.已转化的革兰氏阴性菌在细菌培养基中生长直到浓度达到105-1012CFU/ml;f.收集步骤e中的已转化的革兰氏阴性菌,室温,400g,离心20分钟;g.弃上清液,用1-10%(体积比)的蔗糖和清洗物质清洗疫苗,重悬浮,在37℃下,混合20分钟,诱导自杀性蔗糖-6果糖转移酶(sacB)基因表达,混合物在400g,4℃下再次离心,弃上清液;h.重复步骤g两次;i.疫苗在清洗物质中被悬浮,按佐剂和疫苗体积比为3∶2的比例加入佐剂,使疫苗每一次免疫量的浓度为8.0×105CFU或以上。
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摘要
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本发明公开了一种牛乳腺炎疫苗的制备方法。本发明提供了利用含有核心通用抗原的革兰氏阴性菌,通过含有蔗糖-6果糖转移酶(sacB)基因质粒的转化,在蔗糖的诱导下,使革兰氏阴性菌自杀,收集这些含有核心通用抗原的革兰氏阴性菌,制备牛乳腺炎的疫苗的方法。本发明牛乳腺炎疫苗的制备方法不会对疫苗的免疫原性造成损害,不会产生替代的或非天然的疫苗抗原,所用的化学诱导物质是食用的无毒的蔗糖。同时可以大大减少疫苗中的内毒素,减少副作用,刺激免疫系统抵御全部的大肠杆菌,沙门氏菌等革兰氏阴性菌所引起的牛乳腺炎。
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国际公布
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