公开(公告)号
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CN1857351A
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公开(公告)日
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2006.11.08
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申请(专利)号
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CN200610065445.3
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申请日期
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2006.03.21
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专利名称
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一种抗肿瘤的药物组合物及其制备方法
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主分类号
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A61K36/258(2006.01)I
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分类号
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A61K36/258(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I;G01N30/90(2006.01)I;G01N30/02(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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云南天秀植物科技开发有限公司
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发明(设计)人
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李晓明;仲 行
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地址
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650217云南省昆明市经济技术开发区经开路3号科技创新园B26室
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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北京太兆天元知识产权代理有限责任公司
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代理人
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张 韬
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国省代码
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云南;53
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主权项
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一种治疗肿瘤的药物组合物,其特征在于该药物组合物是由如下方法制成: 原料药:三七提取物10-50重量份 冬虫夏草菌丝体菌粉30-100重量份; 工艺步骤:取5-15目三七粗粉,用40-100%乙醇回流提取1-4次,每次1-3小时,收集提取液,过滤,滤液回收乙醇,至无乙醇味后,真空浓缩1.5-2小时,浓缩液加入等体积蒸馏水,搅拌均匀,过滤,滤液过大孔吸附树脂柱吸附;用2-4倍量树脂床体积蒸馏水洗去水溶性杂质,吸附人参皂苷的树脂柱备用;将上述吸附树脂柱用20-50%乙醇洗脱,20-50%乙醇用量为1-5倍量树脂床体积,主要分离去除原人参三醇组皂苷,根据需要另行处理;用薄层色谱法跟踪检测,其中的薄层色谱法是:展开剂为30-100∶10-50∶2-20的氯仿∶甲醇∶水下层;显色剂:5-20%硫酸乙醇溶液;当薄层色谱上出现原人参二醇组皂苷斑点后,停止用20-50%乙醇洗脱,改用30-100%乙醇洗脱,并收集洗脱液;用0.5-2%活性炭加热回流0.5-2小时脱色,过滤去除活性炭,滤液过大孔阳、阴离子交换柱,进一步脱色脱盐除杂,并用30-100%乙醇洗脱树脂吸附的原人参二醇组皂苷,回收乙醇,真空浓缩,真空干燥,粉碎,收集原人参二醇组皂苷约为提取物投料量的3-4%;取上述纯化的原人参二醇组皂苷粉溶解于30-70%醋酸、20-50%枸橼酸、20-50%草酸、20-50%丙二酸、0.5-2%盐酸或0.5-2%硫酸的水或乙醇溶液中,控制反应条件:酸浓度为1%-55%,水解温度为20℃-100℃,水解时间为0.5小时-10小时,进行酸水解,反应完成后加入与水解转化液等体积的蒸馏水,用6%氢氧化钠溶液中和至中性,收集水解产物的沉淀,用10倍量蒸馏水,分2-3次洗沉淀,真空干燥,粉碎,备用,收率为投料原人参二醇组皂苷的30-40%;将水解产物溶解于5-10倍量50-140%乙醇中,以60℃-70℃加热,回流加快溶解,过滤,滤液用1%活性炭加热回流0.5-2小时脱色,过滤去除活性炭,滤液过大孔阳、阴离子交换柱,进一步脱色脱盐除杂,并用30-100%乙醇洗脱树脂,回收乙醇至总体积的1/4-1,冷却,放置结晶,真空抽滤,收集结晶,真空干燥,粉碎;用高效液相色谱法测定人参皂苷Rh2和Rg3的含量;人参皂苷Rh2含量为24.84%,人参皂苷Rg3含量为44.44%;收率约为原人参二醇组皂苷投料量的4-5%;将采集的冬虫夏草带回实验室,采用单孢子分离法和组织块分离法分离;冬虫夏草菌用PDA培养,10-20℃培养,根据冬虫夏草菌的菌落特征,经过多次挑取接种后,在培养基上未见其他菌落生长,说明菌种已经纯化过程,得到冬虫夏草真菌;冬虫夏草真菌按每袋培养基0.3kg接入1g菌种的比例,使其在PDA培养基上生长,即分离得到冬虫夏草菌菌种菌落;菌落在PDA培养基上生长缓慢,菌落紫褐色,紧实,背面褐色;菌丝无色,分隔,光滑,分生孢子梗无色,单生或簇生与无色球形细胞组成的小子座;菌落圆形,边缘整齐,致密;用接种环将菌种接入PDA培养基,在火焰上将环端烧红灭菌,然后将有可能伸入试管的其余部分,均用火烧过灭菌;将灼烧过的接种环伸入菌种管,先使环接触没有长菌的培养基部分,使其冷却;待环冷却后沾取少量菌或袍子,然后将接种环移出接种管,在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管;从斜面培养基的底部向上部作“Z”形来回密集划线;取出接种环,灼烧试管口,并在火焰旁将棉塞塞上;10-20天后,再把试管培养基上的真菌接入固体或液体发酵培养基,保持10~15℃培养;固体培养基为大米与水的比例为0.8-1.2∶0.9~1.2,每升培养基中还要加入蛋白胨10-20克,蔗糖180-220克,牛肉膏20-30克,磷酸二氢钾3-7克,PH5-8;当菌丝充满整个培养基时,将菌丝分离、烘干即为菌丝体成品,菌丝体粉碎即冬虫夏草菌丝体菌。
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摘要
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本发明公开了一种抗肿瘤的药物组合物及其制备方法,该药物组合物主要由三七提取物和冬虫夏草菌丝体组成。本发明另一目的在于提供该药物组合物制剂的抗肿瘤的用途。
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国际公布
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