一种大肠杆菌表达的重组人白介素-11的高效精纯化方法
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公开(公告)号
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CN101143889A
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公开(公告)日
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2008.03.19
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申请(专利)号
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CN200610068871.2
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申请日期
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2006.09.14
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专利名称
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一种大肠杆菌表达的重组人白介素-11的高效精纯化方法
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主分类号
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C07K1/14(2006.01)I
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分类号
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C07K1/14(2006.01)I;C07K1/18(2006.01)I;C07K14/54(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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齐鲁制药有限公司
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发明(设计)人
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孙丽霞;王克波;魏丽冬;李海东;王晶翼
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地址
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250100山东省济南市历城区工业北路243号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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济南舜源专利事务所有限公司
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代理人
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苗 峻
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国省代码
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山东;37
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主权项
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一种大肠杆菌表达的重组人白介素-11的高效精纯化方法，其特征在于：它是对融合蛋白羟胺切割液进行处理，步骤如下： (1)融合蛋白羟胺切割液经过葡聚糖凝胶G-25(Sephadex G-25)脱盐柱脱盐，得切后脱盐液； (2)脱盐液依次通过阴离子交换层析柱与阳离子交换层析柱串联层析系统，截留未被切开的融合蛋白及大量的杂质； (3)采用Gly-NaOH(甘氨酸-氢氧化钠)缓冲液对串联柱进行平衡，使融合蛋白吸附到阴离子交换层析柱上，目标蛋白吸附到阳离子交换层析柱上； (4)采用添加了NaCl的Gly-NaOH(甘氨酸-氢氧化钠)缓冲液中对进行了步骤(3)处理后的阳离子交换层析柱进行洗脱，使目的蛋白穿出阳离子交换层析柱，收集洗脱蛋白液； (5)洗脱蛋白液经过葡聚糖凝胶G-25(Sephadex G-25)脱盐柱脱盐去除Na+、Cl-，得到高纯度的蛋白样品； 上述步骤(2)中的阴离子交换层析柱的层析介质包括琼脂糖凝胶(Sepharose)类或聚苯乙烯(SOURCE)类，配基包括季铵基Q或二乙基氨乙基DEAE； 上述步骤(2)和步骤(4)中的阳离子交换层析柱的层析介质包括琼脂糖凝胶(Sepharose)类或聚苯乙烯(SOURCE)类，配基包括磺甲基S或磺丙基SP或羧甲基CM。
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摘要
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一种重组人白介素11(rhIL-11)的精纯化方法。步骤包括如下：利用葡聚糖凝胶G-25脱盐柱对融合蛋白进行脱盐后，收集脱盐液进行阴、阳离子交换层析柱串联上样，上样完毕后用特有的Gly-NaOH缓冲液洗脱，收集主要洗脱蛋白液，上葡聚糖凝胶G-25脱盐柱脱盐，得到高纯度蛋白样品。本方法具有适合规模化生产、操作简便、生产周期短、产品纯度高、工艺稳定性强等特点。
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国际公布
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