公开(公告)号
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CN101073666A
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公开(公告)日
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2007.11.21
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申请(专利)号
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CN200710098289.5
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申请日期
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2007.05.11
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专利名称
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一种制备高纯度胰激肽原酶原料药的方法
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主分类号
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A61K38/48(2006.01)I
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分类号
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A61K38/48(2006.01)I;A61K9/19(2006.01)I;C12N9/64(2006.01)I;A61P3/06(2006.01)I;A61P3/10(2006.01)I;A61P7/02(2006.01)I;A61P9/10(2006.01)I;A61P9/12(2006.01)I;A61P25/02(2006.01)I;A61P27/02(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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上海丽珠制药有限公司
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发明(设计)人
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万龙岩;陈一平;杨志建
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地址
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201206上海市浦东金桥出口加工区桂桥路1150号
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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北京泛华伟业知识产权代理有限公司
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代理人
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郭广迅
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国省代码
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上海;31
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主权项
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一种制备高纯度胰激肽原酶原料药的方法,其特征在于包括以下步骤: 1.配制:配制0.15-0.5mol/L的NH4AC缓冲液和0.1-0.5mol/L的NH4AC缓冲液,调整至pH6.0,并测电导值; 2.层析: 2.1平衡:将装有QAE-SepharoseFastFlow离子柱填料的层析柱,用pH6.0的0.15-0.5mol/L的NH4AC缓冲液平衡,直至进出溶液pH值一致、电导值相同后平衡完毕; 2.2进样:调胰激肽原酶中间体的pH值与平衡液相近(6.1~6.2),电导值略低于平衡液电导值(略低0.2~0.3×104μs/cm),根据每升填料最大交换量2000万单位计算上样量并将上样液上柱; 2.3洗涤:用pH6.0的0.15-0.5mol/L的NH4AC缓冲液冲洗柱子,同时用分光光度计跟踪检测流出液在280nm处的吸收值,冲洗至洗出液OD值低于0.5时停止; 2.4洗脱:用pH6.0的0.1-0.5mol/L的NH4AC缓冲液以500~600ml/min流速洗脱柱子,同时用分光光度计进行跟踪检测其在253nm处的吸收值,收集峰液; 3.超滤脱盐:将收集液加纯化水超滤脱盐浓缩,当超出液电导值小于0.1×104μs/cm以下时,即可停止加纯化水,继续浓缩; 4.浓缩液过滤; 5.加辅料冻干; 6.过筛、分装。
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摘要
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本发明涉及一种制备高纯度生物原料药的方法,特别是一种高纯度胰激肽原酶原料药的方法。该方法由胰激肽原酶中间体在优化的分离条件下,经过QAE-Sepharose Fast Flow离子柱层析纯化制得的激肽原酶的原料药。该原料药的纯度高达75%以上,效价增加55单位/mg以上,比活达到350单位/mg蛋白以上。
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国际公布
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