公开(公告)号
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CN101092607A
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公开(公告)日
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2007.12.26
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申请(专利)号
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CN200710074498.6
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申请日期
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2007.05.17
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专利名称
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一种从贴底生长的细胞系获得细胞克隆球的方法
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主分类号
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C12N5/06(2006.01)I
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分类号
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C12N5/06(2006.01)I;C12N5/08(2006.01)I
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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深圳职业技术学院
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发明(设计)人
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金 刚;代建国
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地址
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518055广东省深圳市南山区西丽湖
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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深圳市维邦知识产权事务所
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代理人
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黄 莉
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国省代码
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广东;44
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主权项
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一种从贴底生长的细胞系获得细胞克隆球的方法,其特征在于,其包括如下步骤: 步骤一、将细胞置于常规有血清培养基中进行常规培养,让细胞贴底生长; 步骤二、培养7~20天后,当悬浮的细胞中,完整的单个细胞达到一定数量时,收集悬浮细胞; 步骤三、将收集的悬浮细胞离心,弃去上清液,再用HBSS液清洗剩余物(含有具有较强增殖能力的单个细胞); 步骤四、将清洗后的剩余物置于至少添加有生长因子的无血清培养基培养; 步骤五、培养10~20天后,即可获得直径在50~100微米的克隆球,克隆球部分呈悬浮状,部分为贴底生长,把悬浮的克隆球和贴底的克隆球及贴底细胞分开培养,并定期更换培养基以维持培养基中有效成分的含量,培养瓶中即会持续不断地生长出来新的克隆球。
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摘要
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本发明公开一种从贴底生长的细胞系获得细胞克隆球的方法,包括如下步骤:将细胞置于常规有血清培养基中进行常规培养,让细胞贴底生长;培养7~20天后,收集悬浮细胞;离心处理悬浮细胞,弃去上清液,再用HBSS液清洗剩余物;将清洗后的剩余物置于至少添加有生长因子的无血清培养基培养;培养10~20天后,即可获得克隆球,把悬浮的克隆球分离出来单独培养,贴底的克隆球和贴底细胞仍在一起培养,并定期更换培养基,即会持续不断地生长出新的克隆球。本发明方法简便,且不用消化酶,也不用机械方法制得单细胞悬液,可持续地获得遗传背景完全一致的干细胞克隆球;可广泛应用于干细胞理论研究、再生医学、新药开发等领域。
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国际公布
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