| 公开(公告)号 | CN101096385A |
| 公开(公告)日 | 2008.01.02 |
| 申请(专利)号 | CN200710009084.5 |
| 申请日期 | 2007.06.08 |
| 专利名称 | 抗氧化及预防糖尿病发生的融合蛋白的制备方法及其应用 |
| 主分类号 | C07K19/00(2006.01)I |
| 分类号 | C07K19/00(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;A61K38/16(2006.01)I;A61P3/10(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 厦门大学 |
| 发明(设计)人 | 周克夫;李俊燕 |
| 地址 | 361005福建省厦门市思明南路422号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 厦门南强之路专利事务所 |
| 代理人 | 马应森 |
| 国省代码 | 福建;35 |
| 主权项 | 抗氧化及预防糖尿病发生的融合蛋白的制备方法，其特征在于其包括以下步骤： 1)根据ProTα的基因序列，设计上游引物P1和下游引物P2，上游引物P1和下游引物P2分别为： 上游引物P1：5’GCGGATCCATGTCAGACGCAGCCGTA-3’， 下游引物P2：5’GCGAATCCCTAGTCATCCTCGTCGGTC-3’， 将上游引物P1引入BamHI酶切位点，将下游引物P2引入EcoRI酶切位点； 2)采用RT-PCR方法获得前胸腺素α原全长基因cDNA，将PCR产物纯化后与pMD18-TVector连接，重组载体命名为TP，转化DH5α感受态细胞，将鉴定的阳性菌液测序； 3)采用生物学软件DNAman对7个单克隆基因序列和参考的proTα的基因序列进行比对； 4)用EcoRI和BamHI双酶切ProTαPCR产物，将ProTα基因片断插入经同样双酶切的原核表达载体pGEX 6P-1中，命名为PP，转化大肠杆菌BL21，获得转基因BL21菌株，在LB培养基37℃培养，加入IPTG，37℃诱导表达，菌液离心后的沉淀用上样缓冲液溶解，沸水浴后离心取上清，进行SDS-PAGE电泳，获得融合蛋白。 |
| 摘要 | 抗氧化及预防糖尿病发生的融合蛋白的制备方法，涉及一种融合蛋白。根据ProTα的基因序列，设计上下游引物P1和P2，将P1引入BamHI酶切位点，将P2引入EcoR I酶切位点。采用RT-PCR方法得前胸腺素α原全长基因cDNA，将PCR产物纯化后与pMD18-T Vector连接，转化DH5α感受态细胞，对7个单克隆基因序列和参考的proTα的基因序列比对。用EcoRI和BamHI双酶切ProTαPCR产物，将ProTα基因片断插入经同样双酶切的原核表达载体pGEX 6P-1中，转化大肠杆菌得转基因BL21菌株，培养后加入IPTG诱导表达，菌液离心后的沉淀用上样缓冲液溶解，离心取上清电泳。 |
| 国际公布 |
