公开(公告)号
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CN101100665A
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公开(公告)日
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2008.01.09
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申请(专利)号
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CN200610041239.9
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申请日期
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2006.07.28
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专利名称
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动物通用型重组α干扰素的制备方法
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主分类号
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C12N15/09(2006.01)I
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分类号
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C12N15/09(2006.01)I;C12N15/21(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I;C07K14/56(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;A61K38/21(2006.01)N;A61K9/19(2006.01)N;A61P31/12(2006.01)N
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分案原申请号
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优先权
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申请(专利权)人
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王明丽
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发明(设计)人
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王明丽
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地址
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230000安徽省合肥市梅山路安医大微生物教研室
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颁证日
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国际申请
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进入国家日期
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专利代理机构
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安徽合肥华信知识产权代理有限公司
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代理人
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余成俊
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国省代码
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安徽;34
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主权项
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动物通用型重组α干扰素的制备方法,依次进行以下步骤: (1)、构建克隆载体: 目的基因为: CGGGCTGTGAGGAAATACTTCCACAGACTCACCCTCTATCTGCAAGAGAAGAGCTACAGCCCCTGTGCCTGGG AGATCGTCAGGGCAGAAGTCATGAGATCCTTCTCTTCCTCCAGAAACCTGCAAGACAGACTCAGGAAGAAGGA GAAGGATCAGGCTATCTCTGTGCTCCACGAGATGCTCCAGCAGTGCCTCAACCTCTTCTACACAGAGCACTCG TCTTTGCAGAAGGTTCAGACCATCTCTGTGCTCCACGAGGTGACCCAGCACACCTTCCAGCTCTTCAGCCTGG AGGAATTCTGCACGGGACTTGATTGGCAGCTGACCCGCCTGGAAGCCTGTGTCATGCAGGAGCAGGAGGCGCA GGCCCTCTCTGTGGTCCACGTGATGACCCAGAAGGTCTTCCACCTCTTCTGCCCGGACACGTGCAACCACCTT CGCCCCCAGGATGCCACCTTCTCTCACGACAGCCTCCAGCTCCTCCGGGACATGGCTCCCACACTACCCCAGC TGTGCCCACAGCACAACGCGTCTTGCTCCTTCAACGACACCATCCTGGACACCAGCAACACCCGGCAAGCCGA CAAAACCACCCACGACATCCTTCAGCACCTCTTCAAAATCCTCAGCAGCCCCAGCACTCCAGCCCACTGGAAC GACAGCCAACGCCAAAGCCTCCTCAACCGGATCCACCGCTACACCCAGCACCTCGAGCAATGCTTGGACAGCA GCGACACGCGCTCCCGGACGCGATGGCCTCGCAACCTTCACCTCACCATCA 特异性引物:上游:5’-CGGGCTGTGAGGAAATACT-3’ 下游:5’-TGATGGTGAGGTGAAGGTT-3’ 克隆载体:pMD18-T simple vector (2)、构建表达载体: 表达载体:PET-28a (3)、重组蛋白的表达: 挑取载体构建成功的重组表达菌进行扩增、放大培养,并加入诱导剂诱导表达; (4)、鉴定重组蛋白; (5)、纯化重组蛋白,得到粗制品干扰素。
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摘要
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本发明公开了一种动物通用型重组α干扰素的制备方法,系采用基因工程技术,将已知的猪、禽、犬和牛等7种动物α干扰素序列进行比较,人工合成7种α干扰素出现频率较高的氨基酸分配到各自相应的位置,并对个别位置进行了修改和修饰,得到通用型α干扰素的氨基酸序列,与表达载体PET-28a进行连接,并在大肠杆菌中成功表达。经培养,诱导、复性、纯化、除菌、分装和冻干等工艺制成动物通用型重组α干扰素冻干粉针剂。本发明制备工艺简单,易于工业化生产,经冻干后易运送和保藏。产品质量可靠。动物通用型重组α干扰素动物机体后,具有疗效好、安全可靠和无毒副作用等特点。可用于治疗犬细小病毒病及猪、禽、牛等动物病毒性腹泻等疾病,是一种广谱抗病毒制剂。
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国际公布
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