| 公开(公告)号 | CN101134947A |
| 公开(公告)日 | 2008.03.05 |
| 申请(专利)号 | CN200710029308.9 |
| 申请日期 | 2007.07.24 |
| 专利名称 | 一种胰岛素分泌细胞的制备方法 |
| 主分类号 | C12N5/10(2006.01)I |
| 分类号 | C12N5/10(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 南方医科大学珠江医院 |
| 发明(设计)人 | 王海澜;高 毅;蒋泽生 |
| 地址 | 510282广东省广州市工业大道253号 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 广州市天河庐阳专利事务所 |
| 代理人 | 胡济元 |
| 国省代码 | 广东;44 |
| 主权项 | 一种胰岛素分泌细胞的制备方法，该方法由以下步骤组成： (1)将密度为105～107个/ml的骨髓干细胞单细胞悬液接种于神经干细胞培养基中培养6～8天，诱导为nestin+细胞； (2)将5-100μg含有PDX-1基因的重组真核表达载体通过细胞核转染法引入到步骤(1)所得的nestin+细胞中； (3)将步骤(2)所得的转染了PDX-1基因的nestin+细胞接种于添加了细胞因子和体积百分比为20％的胎牛血清的低糖DMEM中，在5％CO2、饱和湿度、37℃下培养2～15天，诱导分化为分泌胰岛素的细胞；其中， 步骤(2)中所述的真核表达载体是pEGFP、pcDNA或pcMV5； 步骤(3)中所述细胞因子是在培养基中的终浓度为0.1～500nM的胰高血糖素样肽-1；或者是在培养基中的终浓度为5～30mM的葡萄糖；或者是在培养基中的终浓度分别为0.1～500nM和5～30mM的胰高血糖素样肽-1和葡萄糖的混合物。 |
| 摘要 | 本发明提供了一种胰岛素分泌细胞，该细胞是由以下方法制备得到的：将骨髓干细胞在神经干细胞培养基中预诱导为nestin+细胞，然后将含有PDX-1基因的真核表达载体通过细胞核转染法引入到上述nestin+细胞中，最后用含有细胞因子和20％胎牛血清的低糖DMEM中培养诱导分化为分泌胰岛素的细胞；所述的细胞因子为葡萄糖和胰高血糖素样肽-1中的一种或两种。本发明所述的胰岛素分泌细胞能产生和分泌胰岛素和C肽，可作为β细胞的替代物用于糖尿病的细胞治疗或基因治疗。 |
| 国际公布 |
