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四,综合题(第一题12分,2-4每题6分,共30分)
1. 在体外翻译系统中,分析溶菌酶前体的合成.
A.分离到两种不同的mRNA,一种mRNA是野生型的,能编码整个溶菌酶前体分子,包括信号肽,分子量位17.8kd;另一种从突变体中分离而得,缺少编码信号肽的大部分序列,无信号肽的分子量为15.6kd,在体外的翻译系统中,分别加入这两种RNA分子,适当的缓冲液,氨基酸.其中,包括[35S]甲硫氨酸以标记蛋白质,最后,SRP和SRP受体以及微粒体的加入,如表中所列,混合物培养一定时间后,终止反应,免疫沉淀溶菌酶前体,经电泳和放射免疫,分析沉淀物.所获得的蛋白质分子量如下表.试解释结果
mRNA种类 SRP SRP受体 微粒体 蛋白质(KD) 编号
野生型 - + - 17.8 1
+ - - 8.0 2
+ + - 17.1 3
+ + + 15.6 4
突变型 - - - 15.6 1
+ - - 15.6 2
+ + - 15.6 3
+ + + 15.6 4
B.为了进一步研究体外条件下,SRP和微粒体存在时,翻译产物的合成,每一种mRNA分子分别与这两种组分共培养一定时间后,加入蛋白酶,在进行免疫贺电泳分析,在这种条件下,只有野生型mRNA能产生15.6kd的蛋白质.而突变体mRNA不能合成蛋白质,为什么?
2. 已知DNA的序列为:
W: 5'-AGCTGGTCAATGAACTGGCGTTAACGTTAAACGTTTCCCAG-3'
C: 3'-TCGACCAGTTACTTGACCGCAATTGCAATTTGCAAAGGGTC-5'
---------------------------------------->
上链和下链分别用W和C表示,箭头表明DNA复制时,复制叉移动方向.试问:
A. 哪条链是合成后滞链的模板?
B. 试管中存在单链W,要合成新的C链,需要加入哪些成分?
C. 如果需要合成的C链中要被32P标记,核苷酸重的哪一个磷酸基团应带有32P?
D. 如果箭头表明DNA的转录方向,哪一条链是RNA的合成模板?
3. 由脱羧驱动,脂肪酸合成中脱羧作用的意义何在?举出另一代谢途径中的重要反应,它也具有上述机制.
4. 有效的"电子穴"(electron
sinks).有两种重要的具维生素组分的辅酶.它们在酶促反应中都具稳定碳阴离子中间物的作用.请讲出这两种辅酶和对应的维生素的名称,及它们参与催化的主要反应.
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