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| 武汉大学微生物讲义 | |||||
| 作者：佚名 文章来源：医学全在线 更新时间：2006-6-27 | |||||
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实验二十 [目的要求] 1.证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。 2.掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。 [实验原理] 微生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖；脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等。 [教学内容] 大分子物质的水解试验
实验二十一 [目的要求] 1.了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用。 2.掌握通过糖发酵解释的方法。 [实验原理] 糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气体(如氢气、甲烷、二氧化碳等)；有些细菌只产酸不产气。例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。 [教学内容] 糖发酵试验
实验二十二 [目的要求] 了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。 [实验原理] IMViC是吲哚(Indol test)、甲基红(Methyl red test)、伏-普(Voges-Prokauer test)和柠酸盐(Citrate test)四个试验的缩写，i是在英文中为了发音方便而加上去的。这四个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)，多用于水的细菌学检查。大肠杆菌虽非致病菌，但在饮用水中若超过一定数量，则表示受粪便污染。产气肠杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水时要将两者分开。 [教学内容] IMViC试验
实验二十三 [目的要求] 1. 了解微生物自动鉴定系统的原理及其优点 2. 学习与掌握Biolog自动鉴定的方法 [实验原理] 要鉴定一种微生物，用传统的方法需进行大量的工作，其中微生物的生理生化反应是重要的内容之一，但所需时间很长。几十所来，根据微生物的主要生理生化特性相应建立了许多自动鉴定卡或板。迄今，借助计算机的快速发展又创建了不少的微生物自动鉴定系统，包括自动鉴定板（卡）、和数据库两大部份，这样能很方便地将鉴定卡插入计算机，判别实验结果，并将其结果与数据库中所收集的微生物信息进行比较，很快便确定待测菌株的分类地位 [教学内容] Biolog微生物自动鉴定系统
实验二十四 [目的要求] 1.了解常用化学消毒剂对微生物的作用。 2.学习测定石炭酸系数的方法。 [实验原理] 常用化学消毒剂主要有重金属及其盐类、酚、醇、醛等有机溶剂、卤族元素及其化合物、染料和表面活性剂等。重金属离子可与菌体蛋白质结合而使之变性或与某些酶蛋白的巯基相结合而使酶失活；有机溶剂可使蛋白质及核酸变性，也可破坏细胞膜透性使内含物外溢；碘可与蛋白质酪氨酸残基不可逆结合而使蛋白质失活，氯气与水发生反应产生的强氧化剂也具有杀菌作用；染料在低浓度条件下可抑制细菌生长。 [教学内容] 化学因素对微生物的影响
实验二十五 [目的要求] 了解某一抗生素的抗菌范围，学习抗菌谱试验的基本方法。 [实验原理] 生物之间的关系从总体上可分为互生、共生、寄生、拮抗等，微生物之间的拮抗现象是普遍存在于自然界的，许多微生物在其生命活动过程中能产生某种特殊代谢产物如抗生素，具有选择性地抑制或杀死其它微生物的作用，不同抗生素的抗菌谱是不同的，某些抗生素只对少数细菌有抗菌作用。 [教学内容] 生物因素对微生物的影响
实验二十六 [目的要求] 1.了解细菌接合导致传遗重组的基本原理。 2.学习细菌接合实验的基本方法。 [实验原理] 细菌接合是指供体菌与受体菌的完整细胞在直接接触时供体菌的DNA向受体菌单向传递而导致基因重组的现象。大肠杆菌的接合配对是由致育因子(F因子)的存在所决定的。 本实验采用的供体菌是大肠杆菌野生型Hfr菌株，对链霉素呈敏感性(Strs)，受体菌为大肠杆菌营养缺陷型突变体(Thr- Leu- Thi-)，需要苏氨酸，亮氨酸和硫胺素，对链霉素呈抗性(Strr)。短期接合配对以后，在含有链霉素和硫胺素的基本培养基上只能分离到苏氨酸和亮氨酸的重组子(Thr+ Leu+Thi-)，硫胺素标记位于转移染色体的末端，在短期配对过程中因配对中断难以转移到受体细胞，因此硫胺素是Thr+ Leu+Thi-重组子的必须生长因子。 [教学内容] 细菌的接合作用
实验二十七 [目的要求] 学习噬菌体效价测定的基本方法。 [实验原理] 噬菌体的效价就是一毫升培养液中所含活噬菌体的数量。效价测定的方法，一般应用双层琼脂平板法。由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上，噬菌体产生肉眼可见的噬菌斑，因此，能进行噬菌体的计数。但因噬菌斑计数方法其实际效率难以接近100%(一般偏低，因为有少数活噬菌体可能未引起感染)，所以为了准确地表达病毒悬液的浓度(效价或滴度)一般不用病毒粒子的绝对数量而是用噬菌斑形成单位(Plague-forming units,简写成pfu)表示。 [教学内容] 噬菌体效价的测定
实验二十八 [目的要求] 学习并掌握生长谱法测定微生物营养需要的基本原理和方法。 [实验原理] 微生物的生长繁殖需要适宜的营养环境，碳源、氮源、无机盐、微量元素、生长因子等都是微生物生长所必需，缺少其中一种，微生物便不能正常生长、繁殖。在实验室条件下，人们常用人工配制的培养基来培养微生物。由于不同类型微生物利用不同营养物质的能力不同，它们在点植有不同营养物质的平板上的生长图形就会有差别，具有不同的生长谱，故称此法为生长谱法。该法可以定性、 定量地测定微生物对各种营养物质的需求，在微生物育种、营养缺陷型鉴定以及饮食制品质量检测等诸多方面具有重要用途。 [教学内容] 生长谱法测定微生物的营养要求
实验二十九 [目的要求] 1.学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。 2.了解水源水的平板菌落计数的原则. [实验原理] 本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。 [教学内容] 水体中细菌总数的测定
实验三十 [目的要求] 1.了解牛乳的细菌学检查方法和质量判断标准。 2.学习牛乳的巴斯德消毒法 [实验原理] 从健康母牛体内刚挤出的牛奶，含有少量的正常起始微生物。但将牛奶装入未消毒的器具和在分装、运输过程中，会被很多其他微生物甚至致病菌污染。而且牛乳含有丰富的营养物质 (碳水化合物、蛋白质、脂肪、无机盐和维生素等)，在其中的微生物会很快繁殖，因此，一 份牛乳样品的细菌含量可反映母牛的健康状况和牛乳生产与保藏的条件。 [教学内容] 牛乳中细菌的检查
第一章 绪论
一、武汉大学“微生物学” 课程的建设与发展 二、本学期的教学安排 三、微生物与我们 四、微生物的发现和微生物学的建立与发展 （一）微生物的发现 （二）微生物学的奠基 1.巴斯德 2.柯赫 （三）微生物学发展过程中的重大事件 （四）20世纪的微生物学 （五）微生物学在生命科学发展中的重要地位 1、微生物是生物学基本理论研究中的理想实验对象 2．对生命科学研究技术的贡献 3．微生物与“人类基因组计划” （五)我国微生物学的发展 （六）21世纪微生物学展望 五、微生物的类群及特点
思考题： 1. 用具体事例说明人类与微生物的关系，为什么说微生物既是人类的敌人，更是我们的朋友？
第一节 微生物的分离和纯培养 一、无菌技术 1. 微生物培养的常用器具及其灭菌 2. 接种操作 二、用固体培养基分离纯培养 1. 稀释倒平板法 2. 涂布平板法 3. 平板划线法 4. 厌氧微生物的分离 三、用液体培养基分离纯培养 四、单细胞（孢子）分离 五、选择培养分离 1. 利用选择平板进行直接分离 2. 富集培养 六、二元培养物
第二节 显微镜和显微技术 一、显微镜的种类及原理 1. 普通光学显微镜 2. 暗视野显微镜 3. 相差显微镜 4. 荧光显微镜 5. 透射电子显微镜 6. 扫描电子显微镜 7. 扫描隧道显微镜
二，显微观察样品的制备（略）
思考题： 1、为什么说Koch等建立的微生物纯培养技术是微生物学建立与发展的基石？一般可用哪些方法获得微生物的纯培养？ 2、微生物的最显著特征就是个体微小，通常只能通过 显微镜进行观察。试列举在显微观察（光镜和电镜）中通过改变样 品的反差以改善观察效果的技术及方法。 3、试利用表格形式对各类显微镜在原理、样品制备和观察方面的异、同进行概括、比较。 4、 试找到一篇使用微生物照片的文献，分析该文为什么要使用微生物照片，采用的是何种显微观察技术？依你之见， 第三章 微生物类群与形态结构
第一节 真细菌 一、一般形态及细胞结构 （一）个体形态与排列 （二）大小 （三）细胞的结构 1、细胞壁 2、细胞质膜 3、细胞质和内含物 1）概念 2）贮藏物 3）磁小体 4）羧酶体 5）气泡 6）载色体 7）核糖体 8）质粒 4、核区（nuclear region or area） 5、特殊的休眠构造��芽孢 1）概念 2）细菌芽孢的特点 3）芽孢的形成与芽孢的萌发过程 4）芽孢的耐热机制 5）芽孢杆菌（Bacillus）芽孢形成的生理调控 6）伴孢晶体 7）细菌的其他休眠构造 6、糖被 1) 概念 2）特点 7、鞭毛 1）概念 2）观察和判断细菌鞭毛的方法 3）鞭毛的结构及其运动机制 4）鞭毛推动细菌运动的特点 8、菌毛 9、性毛
二、放线菌 （一）概念 （二）形态与结构 1、营养菌丝 2、气生菌丝 3、孢子丝 （三）生长与繁殖 （四）菌落形态 （五）分布特点及与人类的关系 三、支原体、立克次氏体和衣原体 （一）立克次氏体 1、概念： 2、特性 （二）支原体 1、概念 2、特性 （三）衣原体 1、概念 2、特性 四、粘细菌（myxobacteria） （一）概念 （二）生活史 1、营养细胞 2、子实体 五、蛭弧菌（Bdellovibrio） （一）概念 （二）特点 （三）寄生方式 六、蓝细菌（Cyanobacteria） （一）概念 （二）特点
第二节 古生菌 一、概念的提出 二、细胞形态 三、细胞结构 （一）细胞壁 （二）细胞膜 （三）细胞质和内含物 （四）细胞核
第三节 真核微生物 一、 霉菌 （一）概念 （二）分布特点及与人类的关系 （三）形态结构 1、菌丝 2、菌丝的特化 3、细胞结构 （四）菌落 （五）霉菌繁殖方式及生活史 1、繁殖方式 2、生活史
二、酵母菌 （一）概念 （二）分布及与人类的关系 （三）形态结构 1、个体形态 2、细胞结构 （四）菌落特征 （五）繁殖方式和生活史 1、无性繁殖 2、有性繁殖 3、生活史
思考题： 1、试根据细菌细胞结构的特点，分析并举例说明为什么它们能在自然界中分布广泛。 2、细菌、粘细菌、放线菌、霉菌、酵母在繁殖方式上各有 什么特点？ 第四章 微生物的营养
第一节 微生物的营养要求 一、微生物细胞的化学组成 二、营养物质及其生理功能 三、微生物的营养类型(nutritional types) 1．光能无机自养型（光能自养型） 2．光能有机异养型（光能异养型） 3．化能无机自养型（化能自养型） 4．化能有机异养型（化能异养型） 5．营养缺陷型
第二节 培养基 一、选用和设计培养基的原则和方法 1、选择适宜的营养物质 2、营养物质浓度及配比合适 3. 物理化学条件适宜 1）pH 2）水活度 3)氧化还原电位 4. 经济节约 5. 精心设计、试验比较 二、培养基的类型及应用 1、按成份不同划分 1）天然培养基 2）合成培养基 2、根据物理状态划分 1）固体培养基 2）半固体培养基 3）液体培养基 3、按用途划分 1）基础培养基 2）完全培养基 3）加富培养基和富集培养 4）鉴别培养基 5）选择培养基
第三节 营养物质进入细胞 一、扩散 二、促进扩散 三、主动运输 初级主动运输 次级主动运输 基团转位 Na+,K+-ATP酶系统 四、膜泡运输
思考题： 试比较营养物质进入微生物细胞的几种方式的特点。 第五章 微生物的代谢
第一节 代谢概论 第二节 微生物产能代谢 一、 生物氧化 二、异养微生物的生物氧化 1. 发酵 2. 呼吸作用 (1) 有氧呼吸 （2）无氧呼吸 三．自养微生物的生物氧化 1. 氨的氧化 2. 硫的氧化 3. 铁的氧化 4. 氢的氧化 四．能量转换 1．底物水平磷酸化 2．氧化磷酸化 3．光合磷酸化 1）环式光合磷酸化 2）非环式光合磷酸化 3） 嗜盐菌紫膜的光合作用 第三节 耗能代谢（自学） 第四节 微生物代谢的调节（自学） 第五节 微生物次级代谢与次级代谢产物 一. 次级代谢与次级代谢产物 二. 次级代谢的调节（自学）
思考题： 不同营养类型的微生物在不同条件下产生ATP和还原力的方式与特点。
第一节 微生物生长的测定 一、以数量变化对微生物生长情况进行测定 1、培养平板计数法 2、膜过滤法 3、The most probable number method（液体稀释法） 4、显微镜直接计数 二、以生物量为指标测定微生物的生长 1、比浊法 2、重量法 3. 生理指标法
第二节 细菌的群体生长繁殖 一、生长曲线 二、同步培养 三. 连续培养 1. 恒浊连续培养 2. 恒化连续培养
第三节 微生物生长繁殖的控制 一、控制微生物的化学物质 （一）消毒剂(Disinfectant)和防腐剂(Antisepsis) （二） 抗代谢物 （三）抗生素 1、概念 2、作用机制 3、抗药性的产生 二、控制微生物的物理因素 转帖于 医学全在线 www.lindalemus.com |
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