目的和要求
掌握红细胞及白细胞计数、血沉、血红蛋白、红细胞压积容量的检验操作方法及注意事项,所得的结果应基本正确。
内容和方法
一、红细胞计数
计算每mm8血液内所含红细胞数目,称为红细胞计数(Redb100dcellcount,简称RBCcount)。其计数方法有显微镜计数法,光电比浊法、电子计数仪计数法等,目前临床多采用在试管内稀释血液后的显微镜计数法。
(一)原理
用适当的稀释液将血液作200倍稀释,滴入计算室后,在显微镜下计数,经过换算即可求得每mms血液内的红细胞数医学全在,线www.lindalemus.com。经稀释液作用虽仍保留白细胞,但对红细胞计数影响不大,因为一般情况下红细胞与白细胞之比约为1000:1。
(二)器械和稀释液
1.器械。器械包括以下方面。
(1)血细胞计中的计算板。常用的是改良纽巴(Neubauer)氏计算板。
(2)血细胞计中的红细胞吸管。
(3)血盖片。为血细胞计数专用玻片,厚度0.4mm,质地较硬。
(4)沙利氏吸血管、2ml刻度吸管,小试管、显微镜(图9—1、图9—2)。
2.稀释液。稀释液主要有以下两种。
(1)0.85%氯化钠溶液。
(2)赫姆(Hayem)氏液。由氯化钠1.0g,结晶硫酸钠5.0g,氯化高汞0。5g,蒸馏水加至
200ml,溶解后过滤备用。
(三)方法
1.试管稀释法。用2ml刻度吸管吸取红细胞稀释液2ml,置于小试管中。
用沙利氏吸血管10mm3(0.01m1),擦去管外余血,轻轻吹入试管内稀释液底部,再吸上清液冲洗吸管3次,然后立即摇匀。
把血盖片覆盖于计算室上,用小玻棒沾取已混匀的红细胞悬液一滴,轻轻接触两者结合处,使悬液自然流入计算室内。静置3min后,即可计数。
在镜下计数时,先用低倍(10×)物镜找到计算室中央的大方格(红细胞计数区),然后转用高倍(40×)物镜,计数中央大方格内四角的4个和中央的一个中方格,共计5个中方格(80个小方格)内的全部红细胞数(或用对角线的方法数5个中方格)。
为避免重复和遗漏,计数时要按一定的顺序进行。并且对压在方格左边和上边线上的红细胞均计在本格内,压在右边和下边线上的红细胞则不计在内,此即谓“数上不数下,数左不数右”的计数原则。
2.吸管稀释法。用血细胞计内的特制红细胞吸管吸血至o.5刻度外,再吸取稀释液至101刻度,即血液呈200倍稀释医 学全,在线.搜集.整理www.lindalemus.com。然后,按上述方法在计算室上充液、观察并换算。
3.换算法。如缺乏显微镜等条件或大批普查时,对马的红细胞数可利用六五型血沉管来粗略换算。
通常是以静置1h的红细胞柱高的刻度数(不是血沉值),减2乘以系数18.4万,也可以静置24h红细胞柱高的刻度数乘以21.6万,即得每mm3血液内的红细胞数。
(四)注意事项
血细胞计数都有一定的误差,其原因主要是仪器本身和技术操作上的缺陷,以及血细胞在计算室中分布的固有误差。为获得正确结果,应注意如下几方面的事项。
所有器材应清洁、干燥,符合标准,无损坏。试剂、血液符合检验要求。
吸血前混匀血液。吸稀释液和吸血要准。血柱中应无气泡,无血块,同时不要吸得过多。管外壁血迹要擦净。
充液前混匀检液。检液中应无沉淀。充液要均匀,不多,不少,无气泡。充液后不再振动计算板。
镜检计数要严格按顺序和原则进行(计数时误差一个细胞,计算时则要误差一万个细胞),至少要计数五个中方格内的红细胞数,并且各中方格之间的红细胞最高数与最低数之差不应超过20个。
操作要快;最好重复检验2—3次,以验证准确性。
白血病时,白细胞总数显著增高,同时红细胞总数又显著下降,则要将计数结果减去病畜每mm3血液内的白细胞数才是红细胞数。或直接在镜下鉴别并剔除白细胞。
器械清洗方法:沙利氏吸血管每次用完后,先在清水中吸吹数次,然后在蒸馏水、酒精、乙醚中,按次序分别吸吹数次,干后备用。计算板用蒸馏水冲洗后,用绒布轻轻擦干,切不可用粗布擦拭,也不
能用乙醚、酒精等有机溶剂冲洗。
(五)正常参考值
我国幅原辽阔,各地环境条件、海拔高度不同,又受家畜年龄、性别等因素的限制,即使同一品种的动物,红细胞数亦有一定差异。