四、血红蛋白含量测定
血红蛋白(Hemoglobin,简称Hb)测定方法很多,最常用的是沙利(S9hU)氏目视比色法,虽然精确度有一定误差,但方法简便快速,目前仍被兽医临床广泛应用。
(一)原理红细胞遇酸溶解,释出血红蛋白,并被酸化成褐色的酸性血红素;稀释后与标准色柱比色,即可测定每100m1血液中血红蛋白的克数或百分数。
(二)器械和试剂
1.器械。沙利氏血红蛋白计一套(内有测定管一支,装有标准褐色玻璃比色板的比色座一个,刻有10mm3和20mm3容积的吸血管一支),在测定管上有两种刻度,从下往上,一侧有2—24的刻度,表示
100ml冉液中所含血红蛋白克数,另一侧有20—160的刻度,表示100ml血液中血红蛋白的百分数。国产的血红蛋白计是以每100m1血液含14.5g血红蛋白为100%而设制。
2.试剂。1/10m01/L盐酸(亦可用1%盐酸代替)。取浓盐酸8.5m1于1000ml容量瓶中,然后加蒸馏水至刻度。
(三)方法于测定管内加l/10m01/L盐酸至刻度“2”处。
用吸血管吸抗凝血(或耳尖血)至刻度20mm*处,擦净管外壁的血迹,将血液吹入测定管的盐酸液中,再吸取上清的盐酸液至刻度处反复洗涤数次,轻轻摇动测定管(或用玻棒搅拌),使血液与盐酸混合,
静置10min。
慢慢沿测定管壁逐滴加入蒸馏水(或1/lOmol/L盐酸),边加边混匀,边观察,直至液体颜色与标准色柱一致时为止。
读取测定管内液体凹面的刻度数,即为100m1血液中血红蛋白的克数或百分数。
(四)注意事项要注意保持血红蛋白计原套用具,不要随意掉换。抗凝血要摇匀,吸血要准。不要向测定管中用力吹吸,以防产生气泡,万一产生了气泡,可用小玻棒沾少量95%酒精,然后接触气泡,即可消除。静置时间以10min为准,杏则结果可能偏高或偏低。为使结果更为准确,在读数后再加蒸恤水1滴,然后读数,如液体色泽变淡,以前一次的读数为准,如液体色泽不变淡,则以后一次的读数为
准。
(五)正常参考值