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用金属或玻璃开膣器扩张阴道，借助光源，寻找子宫颈外口。然后用另一只手将输精管插人子宫颈内1～2厘米，徐徐输入精液。因此种操作繁琐，易引起母牛不适，输精部位浅，受胎率低，因此当前使用较少。常规操作用两次输精即可，第一次输精后12小时后再输第二次。没有必要进行第三次、第四次输精。增加输精次数不能提高受胎率，还会造成感染、引发子宫或生殖道疾病·浪费冻精。有经验的技术员，如果精液质量优良，在较准确地掌握了母牛发情的开始时间或根据直检判断卵泡发育成熟度，进而推断排卵时间后，1次输精即可获得满意的受胎率（≥60％)。经验不足的技术员，由于母牛发情排卵时间的个体差异较大，慎重起见，应采用2次输精法。
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