如何进行鸭瘟的实验室诊断?
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(1) 病料的采集与处理无菌采集刚死或濒临死亡鸭的 肝、脾脏,按病毒病料的常规处理方法,制作分离病毒无菌病 料样品。(2) 病毒分离与动物回归试验取处理好的无菌病料接种9?14日龄鸭胚的绒毛尿囊膜,0. 2毫升/胚,于38°C孵育, 收集合格的尿囊液,以同样的方法接种鸭胚并传至4代,分别 收集48?96小时死亡胚胎的尿囊液,过滤细菌,保存。剖检死亡胚体,可见皮肤出血,其中以头部、胸部最为严 重。有的肝脏有出血点或坏死。动物回归试验:将30只未免疫的20日龄健康鸭分成3 组,10只/组。实验组腿部肌内注射第三代死亡鸭胚尿囊液, 0.2毫升/只。疫苗组先用鸭瘟疫苗免疫,7日后,腿部肌内注 射第四代死亡鸭胚尿囊液,〇. 2毫升/只。对照组注射等量生 理盐水。如果实验组在注射鸭胚尿囊液96小时后出现流泪, 采食量下降,体温升高,精神沉郁等症状,并陆续死亡,解剖可 见鸭瘟的剖检病变。而对照组和疫苗组全部健康,无死亡,则 分离到的病毒为鸭瘟病毒。(3) 鸭瘟的血清学诊断① 酶联免疫吸附试验(ELISA)应用酶联免疫吸附试验 (ELISA),从血、肝、脾等鸭瘟病料中直接检出病毒,达到提前 检出鸭瘟病毒的目的。通过间接ELISA试验检测鸭群血清, 可以快速、敏感、特异地检出血清中抗鸭瘟病毒抗体,本试验 检测鸭瘟抗体的敏感性比血清中和试验高得多。② 微量固相放射免疫试验(Micro^SPRIA) 以表面能吸 附抗体的塑料或其他材料作为固相载体,用同位素标记抗体 或抗原,以测定相应抗原或抗体的一种微量检测技术。其优 点是特异性强、敏感性高、快速和经济,但所需实验条件要求 较高。③ 中和试验用已知鸭瘟病毒的免疫血清与分离株进行 中和试验,或用已知病毒测定未知血清及效价,中和试验可作 为抗体检测和病毒鉴定的可靠方法。据报道,血清抗体中和 指数达1.75以上的,表示此鸭曾受鸭瘟强毒感染。中和试验 技术要求高,操作复杂,周期长,不适用于基层和大量样品检 测。(4) B瘇的分子生物学诊断聚合酶链式反应(PCR)检 测鸭瘟病毒:主要用于鸭瘟病毒细胞培养毒和禽胚尿囊液培养毒及组织样品的鸭瘟病毒诊断。程安春等建立的PCR检 测鸭瘟病毒,在鸭感染鸭瘟后4小时,就可从粪便等检测到鸭 瘟病毒,特别适合于鸭瘟的早期诊断。(5)电镜检査对分离的鸭瘟病毒进行电镜观察可见疱 疹病毒的典型形态结构,病毒粒子直径范围为32?181纳米, 有一个致密的核心区和一层着色较淡的套膜。
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