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羊病咨询:羊沙门氏菌病的荧光抗体检查法是怎样的

羊沙门氏菌病的荧光抗体检查法是怎样的
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应用炎光抗体技术对疑为沙门氏菌的病料或增菌液进行鉴定,是快速筛选沙门氏菌的方法之一。操作方法如下:1. 试验准备 ⑴荧光显微镜(2) 多价荧光抗体:由生物药厂提供。(3) 被检样品:用各种组织或脏器培养的单个菌落。2. 操作方法用接种环取经过增菌培养的被检样品一钼环,制 成薄薄的涂片,置37<C温箱或室温凉干后,用固定液(乙醇60毫升、 三氯甲烷30毫升、甲醛10毫升混合)固定5 ~ 10分钟,再用95%乙 醇浸洗后凉干。将沙门氏菌突光抗体滴加于标本涂片上,放置盒内,在371经 30分钟后取出,用0.01M PH9.0磷酸盐缓冲液冲去多余的荧光抗 体;再用相同的磷酸盐缓冲液浸洗10分钟,然后用蒸馏水冲洗,凉 干,再滴加PH9.0碳酸盐缓冲甘油后,加盖玻片封片。在荧光显微镜 下观察,沙门氏菌呈发亮的黄绿色杆菌,其他杂菌和杂质发橙黄色荧 光。每一个涂片至少要检査10个视野。结果判定:“+ + + +”表示貪绿色闪亮荧光,菌体周围及中心轮 廓清晰。“ + + + ”表示有黄绿色焚光,菌体周围及中心轮廓清 晰。“ ”表示有黄绿色荧光较弱,菌体周围及中心轮廓清晰。“ + ”表示有暗淡的荧光,菌体尚可见。“ ”表示无荧光,菌体形状不清晰。菌体荧光亮度达+ + ~ + + + + ,菌体形态符合沙门氏菌,并在 多数视野中査出沙门氏菌,判为阳性。'荧光亮度在++以下,判为阴性。凡焚光阳性,培养不典型的菌体,应用原来的增菌液重新进行纯 培养和检査,根据分离培养的结果,再确定是否为沙门氏菌。
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