鸡传染性贫血的诊断方法是什么?
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病原学检查时,可采集病
鸡肝脏、脾脏或血液,制成匀浆,离心取上清液,70℃加热5分钟或用氯仿处理以去除或灭活可能的污染物,接种于马立克病病毒转化的淋巴细胞系MDCC-MSBI细胞培养,观察细胞病变。如细胞体积增大溶解死亡,培养液呈红色,可判为CIAV阳性。也可取病料经绒毛尿囊膜、卵黄膜接种于5~10日龄鸡胚中,雏鸡出壳后7日龄出现贫血,并于10~15日内死亡,即为CIAV阳性。血清学检测可用间接荧光抗体试验和中和试验。在进行间接免疫荧光试验时,可将107个MDCC-MSBI细胞悬浮于2毫升鸡传染性贫血病毒内,37℃作用1小时后加8毫升培养液,培养24小时,取细胞培养悬液以1 000转/分钟,离心5分钟,弃去上清,取50微升上清和沉淀的细胞混合,吸取10~20微升滴加于载玻片上,制成直径5毫米的细胞薄层,风干后用冷丙酮固定10分钟,保存在零下20℃。以
鸡血清作为第一抗体,标记荧光素的
兔抗鸡IgG作为第二抗体,37℃水浴染色30分钟。间接免疫荧光检出耐过鸡血清为1∶320左右,检查时,接种后12小时即可在细胞核内见到荧光颗粒。用雏鸡作中和试验时,可将待检血清进行5倍稀释,56℃灭活30分钟,与等量的可使50%雏鸡发病的有效剂量的鸡传染性贫血病毒混合,37℃作用1小时后肌肉注射5只1日龄雏鸡,每只0.1毫升,接种后观察14天,当有3只被接种鸡健存时判为抗体阳性,2只或1只健存时判为可疑,全部发病时判为阴性。
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