猪圆环病毒2型感染的
流行病学调查
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猪圆环病毒(Porcine circovirus，PCV)属于圆环病毒科圆环病毒属的成员，根据抗原性及基因组成，分为PCVl和PCV2两种，其中PCV2对猪具有致病性，于1998年首次从患断奶后多系统衰竭综合征(post-weaning multisystemic wasting syndrome，PM-WS)的病猪体内分离出来。近年来，猪圆环病毒病的发生呈上升趋势，加拿大、美国、法国、英国等国家都报道了PMWS的发生和流行，国内也不断有关于PCV2以及与其他病原体混合感染的报道。PCV2主要侵害免疫系统，导致感染猪免疫抑制，降低机体对其他病原体的抵抗力和疫苗的反应性，容易导致其他病毒和细菌的继发感染，使死亡率明显升高，给养猪业造成巨大的经济损失。为了解该病在河北省尤其冀东地区及其临壤京津地区的流行情况，在2006年9月至2007年10月期间，采用间接ELISA方法对迁安、滦南、抚宁、廊坊、宁河、大兴等9个县(市)的22个猪场的398份
猪血清检测了PCV2抗体并进行了分析，同时用PCR方法对部分样品进行了病原学检测。1材料与方法1．1待检血清样品样品采自冀东、北京、天津部分地区的11个规模猪场和ll个散养户，共采集血清398份，其中繁殖母猪、后备母猪86份，种公猪17份，育肥猪149份，断奶仔猪146份。耳静脉或前腔静脉采血，分离血清，-20℃保存备用。1．2主要试剂猪圆环病毒病ELISA诊断试剂盒，购自华中农业大学动物医学院动物病毒研究室；蛋白酶K，购自Merck公司；Tris饱和酚，购自鼎国生物技术公司；Taq DNA聚合酶、dNTPs等购自北京天为时代科技有限公司。1．3 引物上游引物U：5 ’-AGT GAG CGG GAA AAT GCAGA-3’，下游引物L：5’-TCC TCC GTG GAT TGT TCTGT-3 ’，由上海生工生物技术有限公司合成。1．4血清抗体的ELISA检测按照猪圆环病毒病间接ELISA检测试剂盒说明进行抗体检测。1．5血清样品中PCV2核酸的PCR检测1．5．1 DNA的提取从ELISA检测阳性的血清样品中随机取14份用于PCV2 DNA提取。DNA提取过程如下：取300μL血清，加入等体积的组织裂解缓冲液，再加入蛋白酶K(20 mg／mL)至终浓度50μg／mL，于50℃消化2 h；取出消化产物，加入等体积的Tris饱和酚，充分振荡混匀后，4℃12 000 r／min，离心10 min；取上层水相500 μL转入l支1．5 mL Eppendorf管中，加入等体积的酚．氯仿．异戊醇混合液，混匀后，4℃12 000 r／min，离心10 min；取上层水相400 μL转入另1支1．5 mL Eppendorf管中，加入800μL预冷无水
乙醇和3 mol／L NaAc(pH 5．2)40斗L，在一20℃放置l—2 h或室温放置30 min以沉淀病毒DNA；4 ℃ l2 000 r／min，离心10 min，弃去上清，用70％乙醇洗涤沉淀，自然干燥后溶于20汕灭菌蒸馏水中，立即用于PCR反应或一20℃保存备用。1．5．2 PCR扩增PCR反应体系为50μL，包括10×PCR缓冲液5μL，10 mmol／L dNTPs 4μL，5 U／μL Taq DNA聚合酶lμL，25 pmol／L上、下游引物各1 μL；DNA模板3μL，无菌去离子水38μ L。PCR扩增条件为94℃预变性3 min；94℃变性45 S，56 ℃退火45 s，72℃延伸45 s，32个循环；72 ℃延伸l0min。DNA产物用1．2％琼脂糖凝胶电泳检测。
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用疫苗预防
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做好疫苗接种
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