猪传染性胸膜
肺炎放线杆菌病的初步分离鉴定与诊治体会
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某养猪场突然暴发一种发病快、死亡率高的的猪病，经
流行病学、临床症状、剖检病理、实验室微生物培养、生化试验、动物实验等诊断，确诊为猪传染性胸膜肺炎放线杆菌病。经药物敏感性试验筛选的敏感药物用于治疗，效果显著。1基本情况1.1发病情况四川省某猪场于2006年5月初从外地购得仔猪800余头，在6月初，突然有2头猪鼻孔流出带血的分泌物而死亡。随后猪群陆续出现精神沉郁、食欲废绝、
咳嗽、体温升高、腹式呼吸、呈"犬坐式"和鼻孔流出带血的分泌物等主要症状。疫情已危及各个猪舍。笔者赶到现场发现已经死亡7头，其余各猪舍均有不同数量的猪发生不同程度的咳嗽、呼吸困难等典型症状。从发病死亡到全群控制期间，共发病246余头，死亡34余头，发病率约为30%，死亡率为13.8%。1.2临床症状:病猪体温升高达41.9℃，咳嗽，喷嚏（有的病猪的鼻腔分泌物中含有血液)、食欲减退或废绝。病猪不同程度的呼吸困难。头、颈、耳尖四肢末端皮肤发绀。最后卧地不起，肌肉
抽搐，窒息而死，病程一般1～3d。有的猪还发出嘶哑的尖叫声。1.3剖检及病理变化:皮肤和黏膜发绀，皮下血管怒张，血液呈暗红色；脾和肾脏无明显肉眼可见变化；腹股沟淋巴结肿大、出血；空肠和回肠黏膜充血、出血，肠壁菲薄透明，肠道充气，肠系膜淋巴结肿大和充血。本次疫病的特征性的剖检变化在心脏、
肺脏及整个胸腔，表现为心脏和肺脏有明显的纤维素性渗出物；
心包粘连，心包膜内布满灰黄色、干
酪样渗出物；气管和支气管充满带血液的泡沫样分泌物；肺充血、出血，呈暗红色，切面多汁，有血色液体流出，肺与胸壁和纵膈粘连，胸壁常有出血点或出血斑。慢性病例常表现为肺脏有大小不等的坏死结节，结节处肺脏和胸壁粘连，切开结节有灰白色脓样物流出。2细菌的分离鉴定2.1取病死猪气管分泌物、肺脏、肝脏、肾脏等组织触片，革兰氏染色，镜检。2.2细菌的分离培养:无菌取死亡猪的气管分泌物、肺脏、肝脏、肾脏等病料，接种于含0.01%NAD的巧克力琼脂平板,37℃需氧和厌氧培养24ｈ。对分离的APP菌株分别进行革兰氏染色，在显微镜下观察细菌形态和染色特性。纯培养后，以40%
甘油生理盐水或20%脱脂牛奶于-70℃保存备用。 2.3细菌的病原特性试验2.3.1培养特性试验:将分离菌株分别接种于普通营养琼脂平板、Ｓ.Ｓ.琼脂平板、麦康凯琼脂平板、TSA琼脂平板、巧克力琼脂平板和
兔血琼脂平板，37℃需氧和厌氧培养24 h、36 h、48h后,观察不同培养基上分离株的生长情况。2.3.2生化特性试验:分离菌株分别接种含有0.02% V因子的乳糖、果糖、
葡萄糖、
鼠李糖、甘露糖、
甘露醇、山梨醇、水杨苷、靛基质、甲基红、VP、硝酸盐和
尿素酶等微量生化试管，37℃培养1~7d，观察和记录试验结果。2.3.3NAD生长试验将分离菌株分别接种于含有终浓度为0.01%的NAD和无NAD的普通营养琼脂平板，37℃培养24h后,观察试验结果。2.3.4溶血性试验:将分离菌株分别接种于
兔血琼脂培养基，37℃培养24h,观察溶血类型。2.4动物实验:将4头健康猪随机分为2组，每组2头，其中第1组为试验组。第2组为对照组；实验猪分别滴鼻接种分离培养的细菌（5mL约100亿个)；对照组每头猪滴鼻接种5 mL灭菌的生理盐水，隔离饲养和观察实验猪临床症状，对实验猪死亡后进行病理剖检和观察。同时对实验猪的病料进行细菌的分离培养。3药物敏感性试验:取分离菌株的液体纯培养物，均匀涂抹接种血琼脂平板，用纸片法做药敏试验。药物分别为：
青霉素、
庆大霉素、卡那霉素、
四环素、
红霉素、氟哌酸、恩诺沙星、复方新诺明、氟甲砜霉素。4结果4.1细菌的分离培养与病原学特性:直接将触片革兰氏染色后可以看到呈革兰氏阴性，多形态的细菌,多为球杆菌、短杆菌、长杆菌,偶有成丝状的细菌，着色不均。分离培养染色结果同直接触片的染色结果；在普通营养琼脂平板、Ｓ.Ｓ.琼脂平板、麦康凯琼脂平板和普通营养琼脂平板，37℃需氧和厌氧条件下培养24~96 h均不生长；在巧克力琼脂平板和血琼脂平板上均能长出透明、细小、米粒大小的圆形露珠样黏液型菌落，菌落直径约1~2 mm；在TSA营养琼脂平板上长出乳白色1~2 mm大小菌落；在含有NAD的普通营养琼脂平板上长出乳白色米粒大小的菌落。该菌可水解尿素酶，发酵乳糖、果糖、
葡萄糖产酸，水杨苷为迟缓发酵，不发酵甘露醇、山梨醇、鼠李糖及甘露糖。靛基质、甲基红、VP试验均为阴性。硝酸盐还原试验阳性，生长需要NAD。在血琼脂平板上呈现明显的β型溶血。4.2动物实验结果:分离菌株接种实验猪后，第2天后体温升高到40℃以上，后来逐渐形成耳、鼻、四肢、腹侧等全身的皮肤充血和发绀。前期鼻孔流出血色黏液、后期为
铁锈色黏液。持续9 d后后肢跛行，而后逐渐发展为后躯麻痹，体温下降到35.0℃以下,最后呼吸困难而死。剖检症状主要是肺大面积充血、出血和坏死，有的地方形成2~5 cm大小的硬结节，切开可见黑色的液体流出。整个肺的外膜和胸腔、膈肌、心包膜粘连，肺和胸腔、膈肌粘连处形成小腔，里面充满黄褐色的液体，胸腔可见大量的纤维素渗出；肝脏肿大；肠壁和肠系膜充血，肠系膜淋巴结充血肿大；后肢膝关节、跗关节、踝关节和蹄关节均有肿大和含纤维素的黄色液体。整个后肢皮下与肌肉之间形成黄白色胶冻样物质。以上均为典型的猪传染性胸膜肺炎症状，表明分离菌株对猪有致病性。分别在剖检后用前面介绍的细菌分离培养方法，无菌取血液、鼻腔分泌物、肺组织、气管、支气管、扁
桃体等组织接种加NAD的兔血巧克力琼脂平板，37℃培养24 h均分离出接种的分离菌株。综上所述，根据各项试验结果，查阅《伯杰氏细菌鉴定手册》（第8版)，确定分离到的1株细菌为猪胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumonia,APP)。4.3药物敏感试验结果:根据细菌抑菌圈直径，高敏药物有：氟甲砜霉素、氟哌酸、恩诺沙星；中敏药物有红霉素、四环素；低敏或无效的药物有复方新诺明、卡那霉素、庆大霉素、青霉素。5防治5.1隔离病猪:将发病猪根据症状的轻重分别隔离,同时对没有明显症状,但与发病猪密切接触的猪实行分别隔离，对环境及猪舍严格消毒；根据以往控制呼吸道疾病的经验，将假定健康猪和发病的能吃饲料的猪全群按20~30mg/kg体重的剂量拌料饲喂氟甲砜霉素，发病的猪不吃饲料能饮水的采用将药物加入饮水中口服，无饮食欲的病猪按20~30 mg/kg体重的剂量肌肉注射氟甲砜霉素的方法连续用药3d。5.2环境消毒及净化措施:猪舍走道、猪圈地面、墙壁、食槽等用具先用3％烧碱水喷洒，干燥后冲洗所有圈舍，然后再用3％烧碱水喷洒消毒。猪粪堆积发酵。药敏试验结果出来后根据试验结果继续选用氟甲砜霉素注射液，按20~30 mg/kg体重的剂量肌肉注射发病猪，每天两次，每次间隔8~12h，连用5d。减少各种应激因素,加强饲养管理与减少工作人员的流动,尽量减少猪群的大量活动,对进出本场的人员实行严格的消毒、更衣等制度,谢绝外来人员的参观等活动,相对固定每栋猪舍的饲养员以及其他工作人员,对有明显临床症状的猪实行专人特别监护,其他无关人员不得随意靠近，对死亡猪必须经过深埋处理或焚烧处理，尽量将疫情控制在一个小的片区而最终在全场净化。
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