如何通过血清学诊断猪
痢疾?
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血清学诊断 1．荧光抗体染色法 将病猪粪便或培养物直接涂片2张，一张用草酸按结晶紫染色镜检，发现蛇形螺旋体时再将另一张片子做荧光抗体染色镜检，发现黄绿色螺旋样菌体，即为猪痢疾蛇样螺旋体。 荧光抗体试验( FAT)：病料涂片干燥后，火焰固定，滴加猪痢疾荧光抗体，37℃染色30min，再用PBS液冲洗3次，每次3min，最后用蒸馏水冲洗，晾干，用
甘油缓冲盐水封片，荧光显微镜检查，如见有黄绿色螺旋体样菌体，即可确诊。本法可能出现假阳性和假阴性结果。 2．凝集试验 (1)显微凝集试验：将被检血清灭活做8- 256倍系列稀释，再分别加入等量抗原(含灭活菌500万个／mL)，在22 - 37℃中感作2h。用接种环取各梯度混合液，分别滴在玻片上，在显微镜下观察。效价（抗体效价为50%凝集的血清最高稀释度)32为阳性。 (2)微量凝集试验(MAr)：以含1%胎牛（
兔)血清的PBS(pH7.2)0.05mL，分别滴人微量滴定板（V形孔)1-6孔。将1 0倍系列稀释的灭活被检血清0.05mL加入第1孔，并行倍比稀释至第5孔(160倍)，第6孔为抗原对照。每孔各加抗原(含灭活菌12亿个／mL) 0.05mL，轻微振荡后置38℃16-18h，再室温静置l-2h。血清效价以50%凝集最高效价表示，感染猪群参考凝集效价（> 10%抽样检测，几何平均效价)XG-1：40。 本法对感染猪群的检出率与分离培养相同，具有一定的诊断价值。 Burrows等(1981)证实玻片凝集试验(SAT)在英国是有效和特异的鉴别蛇形螺旋体的方法，但要求在琼脂表面生长的螺旋体达到一定的数量。通常获得足量的纯培养物很难，需2-3周，且本方法不能区别无毒的蛇形螺旋体的vSl株，SAT的盐水对照中有时出现一些特异性凝集。R.J.Lysons(1991)瞄述了显微镜下检查凝集( MAT)的方法，螺旋体与多克隆血清混悬在400倍相差或暗视野显微镜下能容易地看到凝集（以盐水代替血清为对照)。以0%-50%凝集判为阳性。50%-100%凝集为强阳生。凝集不足10%为阴性。MAT只需少量螺旋体。立用SAT血清进行MAT，能准确无误地鉴别所有分离物。然而，某些蛇形螺旋体菌株的反应比SAT的反应弱。 3．琼脂免疫扩散试验Tric缓冲液(pH8.5)OOmL加入琼脂糖0.9g，充分煮沸融化后，向直径内85mm平皿注入20mL，自然凝固后用外径3mm打孔器，按六角形图案打孔，中心孔与周围孔距为2mm。中心孔滴入抗原，周围孔分别滴人待检血清、阳性和阴性对照血清。置37℃湿盒，24h观察结果，抗原与持检血清孔之间出现特异性沉淀线者判为阳性。 4．酶联免疫吸附试验( ELISA) 以热酚一水(68 ℃)提取I7xII型菌体脂多糖（各溶于0.05mL几碳酸盐缓冲液中，含量分别l0ug/mL及lOug/mL)，包被于固相载体(4 C|C，24h)，以含1%吐温-80和0.5%
牛血清
白蛋白的PBS洗涤。加2倍系列梯度稀释的被检血清，置37 ℃保温2h，洗涤。再加
辣根过氧化酶标记的兔抗猪免疫球蛋白溶液(1：400)，37℃ l.5h，洗涤，最后加底物溶液并终止反应，在室温中轻摇4min，然后在波长405nm下记录光吸收值。猪感染后的1-2周，可用本法测出ELISA滴度，感染后3周达到高峰，19周以后仍保持高于本底光吸收值2-3倍水平。表明ELISA比MAT敏感，可用于个体感染猪的诊断。
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