鹅禽流行性
感冒的确诊方法有哪些?
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实验室诊断本病确诊必须进行病毒分离鉴定和血清学试验。(1)病毒分离①病料采集与处理。分离病毒的病料应采自流行早期具有典型病变的患鹅。病鹅或死鹅应用无菌手续，采取脑、肝、脾组织器官。将病料磨细，加入灭菌生理盐水或灭菌PBS液，制成1：5～1：10的悬液，经3 000转／分'离心30分钟吸取上清液，按每毫升加入
青霉素、
链霉素各1 000单位，混匀后置4～8℃冰箱中作用2～4小时，或37℃温箱中作用30分钟。取少许液体，分别接种T鲜血琼脂培养基和厌氧肉汤培养基，于37℃培养观察48小时，应无菌生长，作为病毒分离材料。也可吸取皮下渗出物，用灭菌生理盐水或灭菌PBS液制成1：5悬液，经3 000转／分，离心30分钟后吸取上清液，经过滤器过滤，滤液按每毫升加入青霉素、链霉素各500单位，于37℃温箱作用30分钟后作为病毒分离材料。患病产蛋母鹅，用无菌手续取有病变卵泡数个，放置灭菌二重皿，置于冰箱内冻结。采样时将冻结卵泡取出立即用灭菌剪刀剪开卵泡膜，将膜取出剪碎磨细，加入灭菌生理盐水或灭菌PBS液制成1：5悬液，经3 000转／分，离心30分钟，吸取上清液，按每毫升加入青霉素、链霉素各1 000单位，混匀，置37℃温箱中作用30分钟后作为病毒分离材料。②鸡胚接种。用4～6枚11日龄SPF鸡胚，或4～6枚11日龄未经禽流感免疫鸡群的鸡胚，每胚绒尿腔接种上述病毒分离材料0.2毫升。接种18小时后每天照蛋4次，连续4天。通常于接种后24～48小时死亡，18小时内死亡鸡胚废弃，18小时后死亡鸡胚放置于4℃冰箱，气室向上，冷却4～12小时。用无菌手续收获绒尿液，并做无菌检查。浑浊的绒尿液和有菌生长的绒尿液弃去不用。将清朗、无菌生长和鸡胚病变典型的绒尿液放置低温冰箱冻结保存供进一步鉴定。鸡胚胚体皮肤充血、出血，
脑出血，绒尿膜增厚、充血。(2)病毒鉴定①血凝试验。在微量凝集板上，从第1孔起，在若干孔内，用定量针头每孔加入0. 025毫升生理盐水。用定量针头吸取0.025毫升等量被检的鸡胚绒尿液加入第1孔，依次做倍量稀释，至最后一个量孔弃去余液。再用定量针头每孔加入0. 025毫升1%鸡红细胞悬液，并用生理盐水代替被检鸡胚绒尿液的红细胞对照孔，立即在微量振荡器上混匀，置室温中30分钟左右判定结果。凡能使鸡红细胞完全凝集的被检病毒液最高稀释倍数，称为1个血凝单位。②血凝抑制试验。在微量凝集板上，根据标准HA亚型抗血清的种类和效价数排，均从第1孔起，用定量针头在每孔加入0. 025毫升生理盐水。在第1孔中分别加入已知抗血清o．025毫升，并依次做倍量稀释至最后1孔弃去余液。每孔加入含有4个凝集单位0. 025毫升被检病毒液。微量板在微量振荡器上混匀，置37℃温箱中作用30分钟后，用定量针头每孔加入0. 025毫升1%鸡红细胞悬液，并设被检病毒液和鸡红细胞对照孔，在微量振荡器上混匀，置室温中30分钟左右判定结果。如被哪个HA亚型抗血清所抑制，即可将被检病毒液定为哪个亚型。(3)血清诊断可以采取病禽或康复禽的血清进行琼脂扩散试验。禽流感的琼脂扩散试验是用禽流感病毒抗原检测相应的抗体，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所已研制出禽流感的特异性诊断液（冻干抗原)，可供琼扩试验应用，方法如下。①琼脂板的制备。a．0. 01摩／升PBS的配制：甲液：Na2HPO4.12H20 3.58克，加1 000毫升蒸馏水。乙液：KH2 Po4 1.36克，加1 000毫升蒸馏水。待甲、乙二液充分溶解，用脱脂棉过滤后分别保存，用时取甲液24毫升加乙液76毫升混合即可。b．制板：o．8克琼脂糖、8克
氯化钠加入甲、乙混合液至100毫升，在水浴中煮沸融化后，加入0.01 %硫柳汞，每个平皿分装18～20毫升，放人冰箱保存。c．打孔：取出平皿，按7孔一组的
梅花图形扣孔，孔径3毫米，孔距4毫米，将孔中的琼脂挑去补底即成。d.加样：用注射器或滴管吸取抗原悬液滴人中间孔中，以加满为止，阳性对照血清分别加入外围的1孔、4孔中，待检血清按顺序分别加入4个外围孔中，每加一个样品，应更换一个针头或滴管。e．加样完毕后放入温箱，待抗原及血清渗透人琼脂中后，将平皿倒过来收在保持一定湿度的瓷盘中，经24～48小时观察结果。②观察结果。如受检血清有禽流感抗体，在抗原与抗体孔之间会产生肉眼清晰可见的沉淀线，沉淀线的一端必须和阳性对照血清沉淀线一端相吻合，即为阳性，不出现沉淀线的为阴性。有的受检样品产生一条以上的沉淀线，仍属阳性反应。
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实验室检测
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实验室检测
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