雏鹅出血性坏死性肝炎的确诊方法有哪些?
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雏鹅出血性坏死性肝炎是一种新发现的鹅的病毒性传染病。目前研究报道极少，未能被许多兽医工作者及饲养者所认识，尤其近10余年来增加不少新鹅病。因此病原分离鉴定显得特别重要。(1)病毒分离①病料采集。用无菌手续采集数只患病濒死或刚死亡雏鹅的肝脏、脾脏病料，放置于无菌的玻瓶冻结保存作为病毒分离材料。②病料处理。将肝、脾病料剪碎、磨细，用灭菌PBS或Hank's液做1：5～1：10稀释，经3 000转／分，离心30分钟，取上清液加入
青霉素、
链霉素各1 000单位，于37℃温箱作用30分钟，经细菌检验为阴性者作为病毒分离材料。③胚胎接种。将经检验的病料，可分离接种10日龄SPF鸡胚、12日龄鹅胚、11日龄鸭胚、12～13日龄番鸭胚，每胚绒尿膜接种0.1毫升，置37～38℃孵化箱内继续孵化，每天照蛋数次，观察10天。48小时内死亡胚胎废弃。大多于4～5天死亡，于4～8℃冰箱冷却，收集绒尿液及绒尿膜'经无菌检验及具有典型胚胎及膜病变者，于低温保存作传代及鉴定用。未死亡胚胎冻死，检查胚胎及膜，有典型病变者于低温保存作传代用。④雏鹅接种。用患病鹅肝脾病料制备的病毒分离材料，或胚胎绒尿液做1：5稀释，接种5只10日龄左右易感雏鹅，每鹅肌肉注射1.0毫升，或爪垫注射0.2毫升，观察15天。一般于感染后5～6天开始发病，死亡雏鹅需作细菌等检验，并检验其病理变化应与自然病例相同。(2)中和试验①胚胎中和试验。胚胎绒尿液（鸡胚、鸭胚、鹅胚)上清液分成2份，1份加入4倍量已知抗本病毒高免血清，另一份加入4倍量灭菌PBS或生理盐水代替血清作为对照，混匀后置37℃温箱作用30分钟，每组接种4～6枚胚胎．每胚绒尿膜0.1毫升，观察8天。血清组胚应全部健活，胚体和膜均无病变，而对照组胚死亡，并具有特征性胚体和膜的病变。②细胞中和试验。4倍递增稀释的本病毒抗血清与等量200TCID50细胞病毒液混合，37℃作用2小时，每稀释度感染6孔鸡胚成纤维细胞。同时用同样的方法分别加入小鹅瘟抗血清、番鸭细小病毒抗血清、禽流感H5、H9亚型抗血清、鸡新城疫抗血清，作用后感染细胞，另设病毒对照。结果，除了本病毒特异抗血清组细胞无病变中和外，中和价为4-4，病毒对照组细胞均出现病变，不能中和本病毒。上述结果表明抗小鹅瘟血清、抗番鸭细小病毒血清、抗禽流感H5、H9亚型病毒血清、抗鸡新城疫病毒血清均不能中和本病毒，无抗原关系。 (3)琼脂扩散试验①琼脂抗原制备。用分离毒株胚体和绒尿膜以及同种胚胎同日龄正常胚体和绒尿膜，分别剪细制成匀奖，经3次冻融后离心取上清液，再用氯仿抽提3次，将上清液浓缩作为琼扩诊断抗原和阴性抗原对照。②抗血清制备。用分离毒株胚胎绒尿液，经多次免疫同种青年禽类制备抗血清，以及未免疫同种禽类血清对照组。③琼脂板制备。以1%琼脂糖、8%NaCl、7.2pH和7.5%甘氨酸配方，其沉淀线最清晰。④琼扩结果。琼扩方法和判定结果与小鹅瘟方法相问。⑤琼脂扩散阻断试验。各分二组，一组抗本病毒株血清，抗小鹅瘟血清、抗番鸭细小病毒血清，分别与等量200ELD50本病毒液混合，另一组加入等量非本病抗血清或健康禽类血清或生理盐水作对照，混合后于37℃作用1小时，经离心取上清液于本病毒株制备的琼扩抗原做琼扩试验。结果，抗本病毒血清与本病毒琼扩抗原为阴性，而对照组琼扩价为1：1 6。
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实验室检测
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