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宠物猫犬犬瘟热诊断治疗方法

犬瘟热最早发现于18世纪后叶,1905年卡尔(Carre)发现其病原为一种病毒,所以本病也曾称为Carre氏病。本病分布于全世界。1980年,我国首次分离获得本病毒。犬瘟热是当前养犬业和毛皮动物养殖业危害最大的疫病。

病原

犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV )属于副黏病毒科麻疹病毒属(Morbillivirus),病毒粒子多为球形,直径为110~550nm,多数在150~330nm之间,亦有畸形和长丝状的病毒粒子,带囊膜,囊膜表面密布纤突,具有吸附细胞的作用。病毒的基因组为不分节、非重叠的负链RNA,由15616个核苷酸组成,从3"端到5"端依次为3"端前导序列、核衣壳基因、磷蛋白基因、基质膜蛋白基因、融合蛋白基因、附着或血凝蛋白基因和5"端引导序列。病毒粒子中的主要蛋白质有核衣壳蛋白(h)、磷蛋白(P)、大蛋白(L)、基质膜蛋 白(M)、融合蛋白(F)、附着或血凝蛋白(H),其中N蛋白和F蛋白与麻疹病毒和牛瘟病毒具有很高的同源性,是可引起交叉免疫保护的共同抗原。F蛋白能引起动物的完全免疫应答。

本病毒在-10℃可生存几个月,在-70℃或冻干条件下可长期存活;在0℃以上感染力迅速丧失,干燥的病毒在室温中尚稳定,在32℃以上则易被灭活。病毒在PH3.0时不稳定,在pH4.5以上时尚稳定,pH7.0有利于病毒的保存。可见光容易将病毒灭活。CDV对乙醚敏感。0.1%甲醛或1%煤酚皂溶液在几小时内灭活病毒,病毒经甲醛灭活后仍能保留其抗原性。

CDV的血凝作用未被充分肯定。其不同毒株拥有共同的可溶性抗原,各毒株在抗原性上没有区别。CDV可在来源于犬、貂、猴、鸡和人的多种原代与传代细胞上生长,但初次培养比较困难。一旦适应某一细胞后,即易在其他细胞上生长,其中以犬肺巨噬细胞最为敏感,可形成葡萄串样的典型细胞病变。鸡胚成纤维细胞应用的最多,既可形成星芒状和露珠样的细胞病变,也可在覆盖的琼脂下形成微小的蚀斑。实验感染可使鸡胚、雪貂、乳鼠、犬等发病,其中以雪貂最敏感,为公认的CDV实验动物。CDV在鸡胚绒毛尿囊膜上能形成特征性的痘斑,被用作测定CDV中和抗体的标准系统。适应鸡胚的CDV株做鼠脑内接种,可引起鼠神经症状与死亡。

流行病学

CDV感染分布于世界各地。在自然条件下CDV可感染犬、貉、貂、小熊、黄鼠狼以及、狼、獾等多种犬科、鼬科和浣熊科动物,其中以1岁以下的动物最为易感。猫科动物如虎、、獅等也可感染发病,甚至致死。病后可获得较强的免疫力。仔犬通过胎盘和初乳获得母犬70%~80%的被动免疫。猴可被实验感染,人尚未见CDV感染的报道。

CD的传染来源,主要是病犬和带毒犬,其次是患CD的其他动物和带毒动物。病毒存在于肝、脾、肺、脑、肾、淋巴结等多种脏器与组织中,通过眼泪、鼻汁、睡液、尿液以及呼出的空气等排出病毒,污染周围空气、饮水、食物、用具等。有些病犬临床恢复后,可长时间向外界排毒,成为不被人们注意的传染来源。不少犬场因为购进带毒犬引起了本病流行。CDV的传染性极强,同一环境饲养的动物,无论采取怎样的隔离措施,最后还是难免互相传染。试验证明,传播的途径主要是呼吸道,其次是消化道。通过飞沫、食物或不洁的医疗卫生用具,经眼结膜、口 腔、鼻腔黏膜以及阴道、直肠黏膜而感染。

CD的发生流行具有明显的品种、年龄和季节性,而且似有2~3年流行一次的周期性。离乳至1岁的犬发病率最高,老龄犬和晡乳犬虽有发病报道,但为数极少。纯种犬与当地土种犬相比,易感性明显增高。秋末夏初CD明显增多。近年来,由于养犬业的发展,犬的频繁交流调运,以致犬群的免疫水平动荡不定,发病周期性不再明显。

症状

潜伏期随机体的免疫状况和所感染病毒的毒力与数量而不同,一般为3~6d,多数于感染后的第4天体温升高,少数于第5天,极少数于第3天或第6天。多数病例首先表现为上呼吸道的感染症状,体温升高,食欲降低,倦怠,眼、鼻流出水样分泌物,并常在l~2d内转变为黏液性、脓性;血液检查则可见淋巴细胞减少,白细胞吞噬功能下降,偶尔可在淋巴细胞和单核【鱼病预防治疗】细胞中检出CDV抗原和包涵体。此后可有2~3d的缓解期,病犬体温趋于正常,精神食欲有所好转,此时如不加强护理和防止继发感染等全身性治疗,就会很快发展为肺炎、肠炎、脑炎、肾炎和膀胱炎等全身性炎症。

支气管肺炎和上呼吸道炎症症状为主的病犬,鼻镜干裂,呼出恶臭的气体,排出脓性鼻液,严重时将鼻孔堵塞,病犬张口呼吸,并不时以爪搔鼻,眼因脓性结膜炎而分泌出大量脓性分泌物,严重时甚至将上下眼睑黏合到一起,角膜发生溃疡,甚至穿孔。病犬发生先干性后湿性的咳嗽,肺部听诊时,呼吸音粗历,有湿性啰音或捻发音。

以消化道炎症为主的病犬,食欲降低或完全丧失,呕吐,排带黏液的稀便或干粪,严重时排高粱米汤样的血便。病犬迅速脱水、消瘦,与病毒性肠炎病犬症状十分相似。尤其是那些离乳不久的幼犬,有时仅表现为出血性肠炎症状,只有通过病原检验,才可发现为CDV感染。

以神经症状为主的病犬,有的开始就出现,有的先表现为呼吸道或消化道症状,7~10d后再呈现神经症状。病犬轻则口唇、眼睑局部抽动,重则流涎空嚼,或转圈、冲撞,或口吐白沫,

牙关紧闭,倒地抽搐,呈癫痫样发作,持续时间数秒至数分钟不等,发作的次数也往往由每天几次发展到十几次,这样的病犬多半预后不良。也有的病犬表现为一肢、两肢或整个后躯抽搐麻痹,共济失调等神经症状,治愈后常留有肢体舞蹈、麻痹或后躯无力等后遗症。

呈现皮肤症状的病犬较为少见。少数患病的幼犬,可于体温升高的初期或病程末期于腹下、股内侧等皮肤薄、毛稀少的部位,出现米粒至豆粒大小的痘样疹,初为水泡样,后因细菌感染而发展为脓性,最后干涸脱落。也有少数病犬的足垫先表现为肿胀,最后表现过度增生、角化,形成所谓硬脚掌。

CDV为一种泛嗜性病毒,可感染多种细胞与组织,但亲嗜性最强的是淋巴细胞与上皮细胞。用荧光抗体检测发现,经呼吸道感染的CDV,24h后即可以在扁体、咽后和支气管后淋巴结中发现其增殖的病毒抗原,病毒在此经2~4d的初次增殖后进入血流,形成病毒血症。此时病毒一方面在血液淋巴细胞和单核细胞中增殖,同时随血流扩散到肝、脾、肺、乳房、胸腺、骨髓等组织和器官,并在其中的上皮细胞和淋巴组织中大量繁殖,使机体的细胞免疫与体液免疫功能受到严重破坏,招致呼吸道支气管博代氏菌、溶血性链www.med126.com球菌,消化道的沙门氏菌、大肠杆菌、变形杆菌等的继发感染,引起体温升高等临床症状。

本病的病程及预后与动物的品种、年龄、免疫水平及所感染病毒的数量、毒力、继发感染的类型等有关。无并发症的病犬,通常很少死亡。并发肺炎和脑炎的病犬,死亡率高达70%~80%。未发生过犬瘟热的地区发生犬瘟热时,动物的易感性极高,死亡率可达90%,甚至90%以上。有些毒株仅使犬表现呼吸道症状或消化道症状,有些毒株则使多数感染犬呈现神经症状。3~6月龄的纯种仔犬发病率与死亡率明显高于其他犬。近年来发现,除了并发大肠杆菌、葡萄球菌、沙门氏菌、败血杆菌、星形诺卡氏菌感染以外,还有腺病毒、冠状病毒的混合感染,因此死亡率表现明显不同。

病变

犬瘟热的病理变化随病程长短、临床病型和继发感染的种类与程度而不同。早期尚未继发细菌感染的病犬,仅见胸腺萎缩与胶样浸润,脾、扁桃体等组织脏器中的淋巴组织减少。发生细菌继发感染的病犬,则可见化脓性鼻炎、结膜炎、支气管肺炎或化脓性肺炎。消化道则可见卡他性乃至出血性胃肠炎。死于神经症状的病犬,眼观仅见脑膜充血,脑室扩张及脑脊液增多等非特异性脑炎变化。

组织学检查可见全身淋巴系统的退行性变化,在肺泡和细支气管内充有巨噬细胞与炎性渗出物,在支气管、细支气管及巨噬细胞内可见有包涵体。早期死于神经症状的病犬,可见有非化脓性脑炎与白质中的空泡形成。晚期病犬则有可能见到由自体抗原一抗体反应引起的脱髓鞘现象。在脱髓鞘病犬的脑室膜细胞、小胶质细胞中,有可能见到类似CDV核衣壳的晶状结构,与人类由麻疹病毒引起的亚急性硬化性全脑炎十分相似。

机理

CDV→上呼吸道粘膜→24h后,在巨噬C增殖→扁桃体和支气管淋巴结→ 2-4天,骨髓、胸腺和脾脏中的单核C →4-6天后,胃和小肠固有层、肠系膜淋巴结、肝枯否氏细胞内增殖→体温升高,白细胞减少(主要L) →8-9天后,扩散至上皮C和神经组织→14天后,多数组织清除CDV,但可存留于神经元和皮肤。CDV →消化道→全身(上呼吸道等)。

诊断

根据流行病学资料和临床症状,可以做出初步诊断。确诊须通过病原学与血清学检查。

1.病原学检查

有病毒分离、电镜观察、荧光抗体染色等方法。CDV培养比较困难。动物试验以雪貂最为敏感,幼犬和鸡胚较为困难。细胞培养以犬肺巨噬细胞最易成功,一旦适应某种细胞后,即可在犬、猴、鸡、人等多种原代和传代细胞上生长。

为检查细胞培养物或外周血白细胞与肝、脾、肺等病料中的CDV,国内外已建立荧光抗体染色检查法,在被检标本的细胞浆内发现特异的荧光斑,即可确诊。用上述标本的冻融液,进行直接负染或加CD特异血清的免疫电镜观察,可迅速做出诊断。

2.血清学检查

中和试验:用标准的CDV与等量的被检血清,于室温感作1h后,接种6~8日龄鸡胚的绒毛尿囊膜,于35~371C温箱中孵育6~7d,通过绒毛尿囊膜上的小"痘斑"出现情况,按统计学的方法,计算该血清的中和指数。也可用敏感细胞,以细胞病变为指标进行微量细胞中和试验。由于试验条件,尤其是所用病毒剂量的差别,所测出的血清中和效价也不完全一致,为此一定要用已知效价的标准血清做参照。

补体结合试验:多以CDV的Vera细胞或鸡胚成纤维细胞培养物为抗原,检测被检血清中的补体结合抗体。由于该抗体出现较晚,感染后2~3周才出现,维持的时间也较短,所以只能作为一种证明近期感染的方法。

间接酶标或荧光抗体法:应用间接酶标或间接荧光抗体法检查血清中的CDV特异IgM抗体,有可能用于本病的早期诊断。试验发现,人工感染的CD病犬,7d后即开始出现IgM特异抗体,14d后达到最高,此后逐渐下降,至28d基本消失,而疫苗接种与回忆反应仅出现IgG,故检出CDV特异性IgM抗体,即可做出CDV感染的诊断。

包涵体检查在CD诊断中有一定的意义。CDV感染犬常可在其眼结膜、膀胱、肾盂、支气管上皮等细胞的胞浆或胞核内检出包涵体。但由于与狂犬病病毒、犬传染性肝炎病毒等所形成的包涵体以及细胞本身某些反应产物难以区分,所以在判定时,应全面综合考虑。

分子生物学诊断技术国内外均已将RT-PCR和核酸探针技术用于本病诊断。该法简便快速,灵敏特异,有广阔应用前景。

防治

研究发现,只有完整的CDV才能使犬同时产生细胞免疫与体液免疫,而且只有同时具备这两种免疫力的犬,才能对CDV产生完全的免疫。体液免疫主要由中和抗体组成,可以中和细胞外游离的CDV,已经进入到细胞内的病毒则需依靠细胞免疫来清除。其中的体液免疫可以通过初乳和胎盘被动传递给新生幼犬,使其在一定时间内,免遭CDV感染,但也可干扰其对疫苗的主动免疫。另一个重要的现象是CDV能使犬的免疫力受到不同程度的抑制,表现为病犬的细胞吞噬功能下降,极易继发感染。为此,在进行CD的预防与治疗时,一定要考虑这两个方面的因素。

影响CD弱毒疫苗免疫效果的因素较多,首先是免疫的程序与时机,最理想的办法是根据母犬的血清CD中和抗体水平与幼犬吃初乳的情况来决定该幼犬的首免曰龄。母犬CD抗体水平很低或生后因某种原因未吃初乳的幼犬,2周龄时即可首次免疫接种。没有条件进行母犬抗体水平监测的,可根据具体情况而定。防疫条件好的或非疫区可于8~12周龄起,每隔2周重复免疫1次,连续免疫2~3次比较理想(表8-1)。对疫区受CD感染威胁的犬,有条件的可先注射一定剂量的CD高免血清做紧急预防,7~10d后再接种疫苗。为防止在等待母源抗体下降期间感染发病,可提前于断奶时即进行首次免疫。为防止母源抗体对首次免疫作用的干扰,可适当增加以后的免疫剂量与次数。为防止免疫犬在产生免疫力之前感染发病,注射疫苗期间,一定要加强防疫措施,严防与病犬或可疑病犬接触。新引进的犬,一定要隔离检查;原有的犬,尤其是种犬和曾经感染过犬瘟热的犬,需定期进行抗体检查和CDV带毒检查。CDV中和抗体在1:100以下的需及时加强免疫,对带有CDV和有散毒可疑的犬,则应作淘汰处理。

CDV灭活疫苗目前已经极少应用,因为抗体滴度下降很快,与初乳抗体相似,每10d下降50%。不论灭活疫苗中是否加入佐剂,抗体持续期都比弱毒疫苗短得多。将CDV接种于雪貂,连续传代以后,降低了其对犬和的致病力,但能刺激产生高度的主动免疫。将此弱毒株接种于鸡胚绒毛尿囊膜后,研制成鸡胚化疫苗,得到广泛应用和满意效果。后来发现细胞培养疫苗的效果也很好,接种后抗体滴度甚高,免疫力坚强而持久。接种动物极少排毒,易感幼犬与接种犬接触不被感染。

上述疫苗的适宜接种时机是在母源抗体消失后数周。为了避免这段时间发生感染,可先用麻疹弱毒苗进行免疫。为获得最高的保护力,麻疹疫苗中病毒含量必须达到104 ID50/ml,并做肌肉接种。当幼犬达4~6月龄时,即可再行接种犬瘟热弱毒疫苗。必须指出,犬瘟热抗体的形成不受麻疹病毒抗体存在的影响,先接种麻疹疫苗的犬,再注射犬瘟热疫苗时,常可较快地产生免疫力。未曾接种麻疹疫苗的易感犬,在接种犬瘟热疫苗后需经2~3周才能产生免疫力。疫苗接种后4周左右,抗体滴度达高峰。抗体的持续期取决于一系列因素,例如年龄、动物的免疫状况、病毒的毒株、疫苗的浓度和接种途径等等。近几年国内已研制出犬瘟热弱毒疫苗,经实际免疫应用,获得了较好的免疫效果。近年来,成犬接种犬瘟热弱毒疫苗时偶有发生接种性脑炎,母犬分娩后3d注射疫苗易使其仔犬发生脑炎,要引以为戒。

有关犬瘟热的免疫程序,年龄大于3个月的幼犬给予一个剂量的免疫;小于3个月的幼犬,应给予两个以上剂量的免疫,每个剂量以2周的间隔肌肉注射。每个剂量含犬瘟热病毒量为104.5TCID50。犬瘟热疫苗免疫后的犬仍有发生犬瘟热的报道。为了更好地提高免疫效果,应用基因工程技术研制犬瘟热基因工程重组活疫苗的研究已经成功,如以金丝痘病毒为载体的F和H基因重组疫苗,在犬和野生动物等免疫试验中证明具有免疫保护作用,已在犬瘟热免疫实践中得到商品化应用。

治疗CD时,一定在尽早大剂量使用CD高效价免疫血清的同时,进行以防止继发感染为中心的对症治疗与增强机体免疫功能的治疗,有条件的最好通过对所感染病原的药敏试验,来选择所用的药物。在被动免疫制剂应用方面,除了高免血清,还可试用CD特异转移因子与犬白细胞干扰素。在主动免疫预防方面,强毒与免疫血清联合接种的方法现在已不使用。强毒脏器灭活苗或细胞培养灭活苗,因其只能引起体液免疫,不能导致细胞免疫,且体液免疫维持的时间也比较短,所以也不常用。应用最多的是用Vero细胞或鸡胚成纤维细胞培养制造的CDV弱毒疫苗,有的已经与犬副流感、传染性肝炎、细小病毒性肠炎等弱毒制成了联合苗。

在治疗CD时,还应注意可能随时出现的呼吸道和消化道的细菌继发感染,及时注射适当的抗生素。对于因出现腹泻而脱水的病犬,需要补充体液和电解质;对于表现出神经症状的病犬,治疗的意义不大,症状进一步恶化者,可以考虑进行安乐死术。

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