网站首页
开云app安装不了怎么办
药师
护士
卫生资格
高级职称
住院医师
畜牧兽医
医学考研
医学论文
医学会议
开云app安装
网校
论坛
招聘
最新更新
网站地图
中医理论中医临床诊治中医药术语标准中国方剂数据库中医疾病数据库OCT说明书不良反应中草药图谱药物数据药学下载
您现在的位置: 医学全在线 > 中医理论 > 中医书籍 > 正文:第三节 磷脂测定
    

动脉粥样硬化:第三节 磷脂测定

磷脂(PL)并非单一的化合物,其分子内含有磷酸基的多种脂质,磷脂是这一类物质的总称。血中PL包括:①卵磷脂占60%和溶血卵磷脂占2%~10%;②磷脂酰乙醇胺等,占2%;③鞘磷脂,占20%。血清PL定量方法包括测定无机磷的化学法和酶法两大类。1.化学测定法过程包括:①抽提…

磷脂(PL)并非单一的化合物,其分子内含有磷酸基的多种脂质,磷脂是这一类物质的总称。血中PL包括:①卵磷脂占60%和溶血卵磷脂占2%~10%;②磷脂酰乙醇胺等,占2%;③鞘磷脂,占20%。

血清PL定量方法包括测定无机磷的化学法和酶法两大类。

1.化学测定法过程包括:①抽提分离;②灰化;③显色、比色的三个阶段。

2.酶测定法

可分别利用磷脂酶A、B、C、D等4种酶作用,加水分解,测定其产物,对PL进行定量。一般多采用磷脂酶D(PL-D)进行定量。PL-D可作用于含有卵磷脂、溶血卵磷脂和鞘磷脂以及含胆碱的磷脂,这三种磷脂约占血清总磷脂的95%。本法快速准确,便于自动生化分析仪器进行批量检测。

一、化学法(消化法)

1.原理

以有机混合试剂(无水乙醇、乙醇)抽提血清中磷脂,再用浓硫酸和过氯酸消化抽提www.lindalemus.com/pharm/液中的脂类和其他有机化合物,用硝酸盐与磷反应生成有色化合物,比色定量。本法可用组织细胞磷脂的抽提定量。

2.试剂组成

代号种类浓度组成贮2~8℃有效时间
R-1抽提液 无水乙醇:乙醇=3:1  
R-2消化液 用1L密器,加水约500ml,置冷水中缓缓加浓硫酸280www.lindalemus.com/jianyan/ml到水中,冷却后加过氯酸(70%,AR)65ml,混匀,加蒸馏水至1000ml  
R-3显色剂 钼酸铵(A.R)2.5g+无水醋酸钠8.2g,加蒸馏水溶解并稀释至1L,监用时取此液体9份加新配的VitC液(10%)1份,混合即可  
R-4参考液(贮存液)1mg/L 称干燥KH2PO(A.R)0.4393g,溶于蒸馏水中,转移至100ml的容量中,用蒸馏水加至刻度。 冷藏
R-5参考应用液0.04mg/ml取贮存液2ml加至50ml容量中,加水至刻度 冷藏

3.操作

按图15-5操作。

4.计算

血清脂性磷浓度=ESA/EST×10(mg/dl)

血清磷脂(以卵磷脂计)=ESA/EST×10×0.3229(mmol/L)

图15-5 血清磷脂测定(消化法)操作图*采用带塞玻璃试管

二、酶法

1.原理

磷脂酶D因特异性不高,能水解血清中卵磷脂,溶血卵磷脂和神经磷脂(三者占血清总磷脂的95%),释放出胆碱,胆碱在胆碱氧化酶作用下生成甜菜碱和H2O2,在过氧化物酶作用下,H2O2,4-氨基安替比林、酚发生反应生成红色醌亚胺化合物,其颜色深浅与这三种磷脂的含量成正比,在500nm波长下比色计算结果为:

2.试剂

(1)酶应用液(参考配方):每100mlTris-His缓冲液(50mmol/L,pH7.8)中含:

磷脂酶D45U
胆碱氧化酶100U
过氧化物酶220U
4-氨基安替比林12mg
20mg
CaCl2·2H2O8mg
TritonX-1000.2g

(2)标准液:纯卵磷脂,临用前配制,5mg/2.5ml蒸馏水(含TritonX-1000.5%)

3.操作

(1)标本采集:空腹12h抽静脉血,不抗凝,分离血清或抗凝血分离血浆。

(2)在3.0ml酶应用液中加入血清(浆)20μl,标准管加标准液20μl,空白管加水20μl,放置37℃水浴10min后,波长500nm,比色,空白管液调零。

4.计算

血清磷脂(mg/dl)=TA/SA×200

血清磷脂(mmol/L)=血清磷脂(mg/dl)×0.01292

...
关于我们 - 联系我们 -版权申明 -诚聘英才 - 网站地图 - 医学论坛 - 医学博客 - 网络课程 - 帮助
医学全在线 版权所有© CopyRight 2006-2046,
皖ICP备06007007号
百度大联盟认证绿色会员可信网站 中网验证
Baidu
map