网站首页
开云app安装不了怎么办
药师
护士
卫生资格
高级职称
住院医师
畜牧兽医
医学考研
医学论文
医学会议
开云app安装
网校
论坛
招聘
最新更新
网站地图
中医理论中医临床诊治中医药术语标准中国方剂数据库中医疾病数据库OCT说明书不良反应中草药图谱药物数据药学下载
您现在的位置: 医学全在线 > 中医理论 > 中医书籍 > 正文:人白蛋白(或丙种球蛋白)纯度测定
    

中国生物制品规程:人白蛋白(或丙种球蛋白)纯度测定

(醋酸纤维素薄膜电泳法)1试剂1.1 巴比妥缓冲液(Ph8.6)取巴比妥2.76g,巴比妥钠15.45g,加蒸馏水溶解成1000ml。1.20.5%氨基黑染色液取氨基黑10B0.5g,溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及蒸馏水40ml的混合液中。1.3漂洗液取乙醇45ml,冰醋酸5ml及蒸馏水50ml,混匀。1.40.2mo…

(醋酸纤维素薄膜电泳法)

1试剂

1.1 巴比妥缓冲液(Ph8.6)

取巴比妥2.76g,巴比妥钠15.45g,加蒸馏水溶解成1000ml。

1.20.5%氨基黑染色液

取氨基黑10B0.5g,溶于甲醇50ml、冰醋酸10ml及蒸馏水40ml的混合液中。

1.3漂洗液

乙醇45ml,冰醋酸5ml及蒸馏水50ml,混匀。

1.40.2mol /L氢氧化钠

取8g氢氧化钠,加蒸馏水溶解成1000ml。

1.5透明液

取冰醋酸25ml,加无水乙醇75ml,混匀。

www.lindalemus.com/rencai/

2 操作

2.1电泳

将膜条(2×8cm)粗糙面向下,浸入巴比妥缓冲液中,待完全浸透,取出用滤纸吸去多余的缓冲液,将膜条粗糙面向上,加于电www.lindalemus.com/jianyan/泳支架上的滤纸桥上(或桥下),于膜上距负极端2cm处,直线状滴加蛋白质含量约5%的样品2~3μl,通电,电流控制在0.4~0.6mA/cm[总电流量=生产要膜的宽度(cm)×膜条数],同时取新鲜人血清作对照,电泳时间以白蛋白丙种球蛋白之间的电泳展开距离达3~4cm为宜。

2.2 染色

电泳完毕,将膜条取下浸于染色液中,2~3分钟后,用漂洗液反复漂洗至底色完全脱净。

2.3 透明

将漂净并完全干后的膜条浸于透明液至全部浸透为止,取出平铺于洁净的玻璃板上,干后即成透明薄膜,可供扫描法测定样品纯度和作为标本长期保存用。

2.4 纯度测定

2.4.1 洗脱法:将漂洗净的膜条用滤纸吸干,与正常人血清的电泳图谱作对照,剪下白(或丙种球蛋白)带A及其他杂蛋白质区带B,分别浸于5ml0.2mol/L氢氧化钠溶液中,振摇数次,至色泽完全浸出后,于620nm波长下测其OD值,以相同条件下,无蛋白质部分的膜条(其长度分别同A及B)作空白对照。

样品中白蛋白(或丙种球蛋白)含量%=A的OD值-A空白的OD值/(A的OD值-A空白的OD值)+(B的OD值-B空白的OD值)×100%

2.4.2 扫描法:将干燥的样品醋酸纤维素薄膜电泳图谱放入自动光密度扫描仪,通过反射(未透明薄膜)或透射(已透明薄膜)方式测定各蛋白质电泳区带的OD值,根据仪器性能,可自动或手工方法计算出样品白蛋白(或丙种球蛋白)的百分含量。

附注

用扫描法测定白蛋白(或丙种球蛋白)纯度时,可采用丽春红染色法,其染色液及漂洗液配方如下:

0.2%红染色液:

取丽春红0.2g,磺基水杨酸3g及三氯醋酸3g,用蒸馏水溶解并稀释至100ml。

漂洗液:

取冰醋酸3ml,用蒸馏水稀释至100ml。

...
关于我们 - 联系我们 -版权申明 -诚聘英才 - 网站地图 - 医学论坛 - 医学博客 - 网络课程 - 帮助
医学全在线 版权所有© CopyRight 2006-2046,
皖ICP备06007007号
百度大联盟认证绿色会员可信网站 中网验证
Baidu
map