中国幽门螺杆菌研究:幽门螺杆菌与胃十二指肠疾病的关系

自1983年Warren和Mashall首次从胃粘膜标本中分离培养出幽门弯曲菌（CampylobacterPylori)，并提出它可能与慢性胃炎（CG)和溃疡病（PU)病密切相关后，引起了全球关注，也为CGG、GU的病因学研究开创了一条新途征。1990年9月国际微生物联合会鉴定为“幽门螺杆菌”（Helicobacter Pylori, Hp)。我国是慢性胃病多发国家，自1985年张振华首次报告从胃粘膜中检出此菌后，已有不少单位对此进行研究，我院自1988年5月以来开展了此项研究，对325例因上消化道症状行内镜检查者进行研究，旨在从临床分析探讨Hp与慢性胃炎、消化溃疡和胃癌的关系。

1 对象和方法

1.1 对象

具有上消化道症状的325例，男248例，女77例；年龄17岁～75岁，平均年龄43.9岁。根据内镜及组织学诊断，慢性浅表性胃炎（CSG)72例，慢性萎缩性胃炎（CAG)34例，胃溃疡（GU)54例，球部溃疡（DU)108例，胃癌（GC)13例，正常（N)14例。按胃粘膜中是否有中性粒细胞浸润将胃炎分活动性和非活动性胃炎。

1.2 方法

用OlymPus GIF XQ10内镜进行检查,CG,DU,N组取距幽门5cm内的胃窦粘膜，GU取溃疡边缘粘膜，GC取癌组织，各取4～5块，分别作细菌培养、直接涂片、组织切片、HE染色及改良Warthin-Starry染色，部分作扫描电镜观察。将活检标本接种于肉浸液加8%～10%羊血琼脂平板中，于改良厌氧灌（5%O2，7%CO2，80%N2，8%H2，湿度98%)内，37°C，培养3d～5d，见1mm～2mm大小的露滴样、光滑、灰白色、轻度溶血的菌落，菌落涂片镜检，生化鉴定（尿素酶、氧化酶、触酶、马尿酸分解试验等)。7d不见菌落者阴性。Hp阳性标准：培养阳性或尿素酶阳性加直接涂片、改良W-S染色阳性中任一项阳性者。活检标本用10%福乐马林固定、切片厚5μm，常规HE染色，作组织病理学诊断。改良W-S染色，在10×100倍光镜下寻找Hp。供扫描电镜（SEM)观察的标本先用生理盐水轻轻冲洗粘膜面，用2.5%戊二醛固定及1%锇酸固定后，经脱水，临界点干燥、喷金后，在日立S—570型电镜下观察。所有资料按四格表行X2检验，若例数小于40或理论值小于1，则采用确切概率法计算。

2 结果

2.1 各种胃病Hp的检出率

胃粘膜标本分别用4种方法检测，Hp的检出率分别为尿素酶试验69.9%，直接涂片52%，改良W-S75.1%，培养63.1%；以改良W-S法检出率最高，直接涂片法检出率最低；其中直接涂片法与其它三种方法比较，差异有非常显著性（P<0.05)；培养法与改良W-S比较，差异有显著性（表1，P＜0.05)。

Hp的总检出率为70.2%，CSG，CAG，GU，DU的Hp检出率高于N组，差异有非常显著性（P<0.01)；（均P<0.01)；DU检出率高于CAG，CSG，GU组（均P<0.01)；CSG，CAG，GU组间两两比较，Hp检出率无显著差异（表2，P<0.05)。

表1 胃十二指疾病Hp检出率

*表示均伴有慢性胃炎

表2 胃十二指肠疾患Hp检出率

2.2 组织病理学检查

改良W-S染色中Hp存在于胃粘膜表面上皮细胞粘液层间、胃小凹中，菌量多时可在www.lindalemus.com/yaoshi/浅层腺体的腔中见到。在浅黄色背景上呈棕色或棕褐色弯曲状、弧形菌。在慢性胃炎中，Hp的存在与炎症的活动性密切相关（表3，表4)。在CSG组57例活动性胃炎，Hp阳性55例；45例非活动性胃炎，17例Hp阳性；二者比较差异有非常显著性（P<0.05)；在CAG组，20例活动性胃炎，19例为Hp阳性，14例非活动性胃炎，5例Hp阳性，二者比较差异显著性（P<0.05)。

表3 慢性浅表胃炎活动性与Hp检出率

表4 慢性萎缩性胃炎活动性与Hp检出率

2.3 SEM观察

对4例慢性胃炎标本进行SEM观察，这4例用上述4种方法均检出Hp。电镜下见Hp呈弧形或“S”形，少数量椭圆形或肾形。约0.5μm×2.5μm大小，菌体光滑，中央部分电子密度低，两端钝圆，有1～5根单极鞭性鞭毛。Hp紧贴胃粘膜上皮细胞。

3 讨论

作者对几种常用方法Hp检出率进行比较，以改良W-S检出率最高，直接涂片法检出率最低，且直接涂片与其它3种方法比较差异显著。细菌培养是鉴定Hp阳性最可靠的方法，但培养需一定条件和技术，影响因素多，阳性率较低，一般单位难以开展。直接涂片可见革兰氏阴性弯曲菌，但受涂片技巧和镜检经验限制，阳性率较低。改良W-S染色是一种检出率高的经典方法，但其操作复杂，耗时耗资。尿素酶试验具有快速、简便、经济、敏感性、特异性较高等优点，易普及推广，但仍有一定假阴性和假阳性。本组Hp总检出率70.2%，以DU的阳性率最高80.7%，GCa和“正常”组检出率低，分别为23.1%、7.1%。GCa组和“正常”组与CSG，CAG，GU，DU组比较，Hp检出率差异有异常显著意义GCa组与正常组比较，差异无显著性；CGS，CAG，GU间两两比较差异无显著性；而DU高于任何一组（P<0.01)。

我们的结果表明，胃粘膜中Hp存在与慢性胃炎和消化性溃疡的发病有关，这与前人报告结果一致。组织病理学发现活动性胃炎中的Hp检出率显著高于非活动性胃炎，虽也有报告未见此种关联。Shousha等用透射电镜观察到，胃粘膜上皮间有中粒细胞浸润，且与Hp混合在一起，一些中性粒细胞可吞噬Hp，提示Hp可能引起炎症。我们用抗Hp药物De-Nol治疗71例慢性胃炎，Hp的清除率87.8%，且随Hp的清除，组织学检查胃炎明显减轻。血清学检查表明抗Hp抗体与慢性胃炎呈正相关。这些都提示Hp可能是慢性胃炎的病因。据报道用雷尼替丁治疗伴Hp感染的球部溃疡，4周后溃疡愈合，但Hp仍存在。用雷尼替丁联合抗生素或De-Nol治疗溃疡，难治性溃疡可治愈，溃疡复发率明显降低。这提示Hp即使对溃疡病无直接致病作用，亦可能与溃疡病顽固不愈及其复发密切相关，可能虽溃疡发生的重要危险因素。

在胃癌组织Hp检出率与正常组织比较差异无显著性，提示此菌与胃癌可能无直接关系，其他作者也有类似报告。Hp作为慢性胃炎和溃疡病的病因，其真正致病机理仍未完全阐明，只是间接证据证明Hp存在于大部分胃炎和溃疡病中，经抗Hp治疗随Hp清除，炎症改善，溃疡复发率降低。但还有部分胃炎、溃疡中并未检出Hp，其他抗溃疡药治疗后虽Hp仍存在，但溃疡可以愈合。因此，还需要进一步建立成功的动物模型来促进研究Hp在慢性胃炎和溃疡病中的确切作用。