76说明双缩脲法成为测定血清总蛋白参考方法的理由？并解释其标化法计算公式中的0.298是什么含义？
（1）我国卫生部医政司推荐的双缩脲法试剂配方是Doumas1981年推荐的优化配方，此配方的精密度和准确度优于其它生化专著中介绍的不同配方；本方法简便、准确、重复性好，试剂与蛋白质肽键反应专一，不受蛋白质分子量和氨基酸组成的影响，干扰因素较少，故成为公认的测定血清总蛋白的参考方法。
（2）Doumas等确定0.298为纯蛋白—双缩脲复合物的吸光系数。即按照Doumas的标准试剂配方，在波长540nm，比色杯光径1.0cm，分光光度计波长带宽≤2nm等标化条件下，双缩脲反应液中蛋白质浓度为1.0g/L时的吸光度。
77血清白蛋白溴甲酚绿（BCG）法为什么在反应5S时读取A值，而溴甲酚紫（BCP）法为什么定在60S以后？
因为血清白蛋白与BCG呈现即刻反应后反应液颜色即不再加深，但是所测定的血清样品中，除白蛋白外尚有相当数量的a1-抗胰蛋白酶、a1-酸性糖蛋白、转铁蛋白、触珠蛋白、c反应蛋白和铜蓝蛋白等所谓“慢反应蛋白质”，它们与BCG的反应要在15min甚至1h才能完成。为了防止这种非特异性反应的干扰，故将BCG法的读取A值时间定在5s（或10s），这样所测得的结果与免疫火箭电泳法高度一致。
BCP试剂只与白蛋白反应，不与白蛋白以外的其它蛋白质显色。故此法测定A值的时间可放在呈色后1h以内，不影响测定值的准确性。
78何谓真血糖？判断一项血糖测定方法的测定结果是否接近血糖真值，主要依靠方法的什么性能？试举例加以说明。
所谓真血糖是指血液中的葡萄糖。
测定方法的特性越高其血糖测定结果越接近真值。例如同位素稀释—质谱法所测得的血糖值没有偏差，是公认的决定性血糖测定方法；已糖激酶（HK）法试剂两个工具酶对底物高度专一，故其测定结果准确性很高，是公认的血糖测定的参考性方法；而葡萄糖氧化酶（GOD）法中GOD对葡萄糖的专一性是很高的，但其第二步反应的过氧化物酶（POD）特异性差，维生素C、胆红素、尿酸等多种物质能使H2O2还原，使测定结果偏低。所以GOD法只能用于常规分析。
79何谓Trinder反应？试说明此反应的分析特性。
Trinder反应是指对氧化酶催化底物氧化过程中产生的H2O2在过氧化物酶作用下，与4—氨基安替匹林及苯酚生成红色色素的反应。此反应首先由Trinder于1969年提出，故名。Trinder反应最初使用苯酚作生色剂，后来有许多作者提出十余种化合物替代苯酚（如2.4—二氯酚等），使反应的灵敏度得以显著提高。Trinder反应构成了葡萄糖、胆固醇、甘油三脂及尿酸等酶法测定的基础，有较为重要的使用价值。但是由于催化Trinder反应的过氧化物酶对底物专一性差，维生素C、尿酸、谷胱甘肽及胆红素等还原性物质也与色原性物质竞争H2O2，从而使氧化过程中产生的H2O2被消耗，导致色素形成减少，测定结果偏低。此外，工具酶中如夹杂有较多的过氧化氢酶，也能消耗氧化产物H2O2，使被测物的测定值偏低。
80评述K、Na、Li元素原子火焰发射光谱的发生原理。
火焰光度分析法是一种发射光谱分析方法。样品中的K、Na、Li原子受火焰的热能作用而被激发处于高能级的激发态。处于激发态的原子不稳定，要跃迁回到低能级的基态。当此电子跃迁回到基态时就放出能量，发射出元素特有波长的辐射谱线，利用此原理可进行火焰光度分析。Na原子的3s基态电子经火焰激发可跃迁到3p、3d或4p亚层中。当此电子由3p返回到3s亚层时。则产生589nm波长的辐射（黄色火焰）。K原子受火焰激发时，4s电子可跃迁到4p、4d或5p亚层，若由4p返回4s基态时，可辐射出767nm波长的深红色光谱。Li原子的2s电子受火焰激发可跃迁到2p、3p或3d亚层，若由2p返回2s基态时，发射出光谱波长为671nm（红色火焰）。
81说明Fe、Zn、Cu、Mg的原子吸收光谱特征？
原子吸收分光光度法是基于从光源辐射出具有待测元素特征谱线的单色光，通过试样蒸气时被蒸气中待测元素基态原子所吸收，由辐射谱线被减弱的程度来测定试样中待测元素含量的方法。该方法的技术关键是采用由被测元素作阴极的空心阴极灯作光源，光源灯发出含有被测元素共振线的线光谱通过原子化器时，其中的共振线被待测元素所吸收，吸收的多少与待测元素的含量有关。
Fe、Zn、Cu、Mg等元素强烈的特征性吸收谱线是：
Fe：248.3nm
Zn：213.8nm（空气—乙炔火焰）
Cu：324.5nm
Mg：285.2nm（空气—乙炔火焰）
82何谓血浆功能酶？举例加以说明。
血浆功能酶是指在血浆中有确定的和特异生理生化功能的一类酶，它们不仅在血浆中发挥催化作用，而且酶在血浆中的浓度也明显高于其它组织。血浆功能酶包括：
（1）大多数凝血因子和纤溶酶原：如凝血酶原（第Ⅱ因子）、前激肽释放酶、纤维蛋白溶酶原等。
（2）参与血浆脂蛋白代谢的两种酶：脂蛋白脂肪酶（LPL）和卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）。
（3）铜蓝蛋白（亦称亚铁氧化酶）。
（4）肾素（即血管紧张肽原酶）：肾素是由肾小球旁器的颗粒细胞合成并释放进入血液的一种蛋白水解酶，催化血管紧张素原转变成血管紧张素Ⅰ。
（5）血浆胆碱脂酶，等。
83何谓酶的催化活性浓度？酶的活性单位如何表示？
（1）酶的催化活性浓度是酶含量测定的一种表示方法。它是利用酶的催化特性，通过测定被加速的反应速度来间接的算出酶含量的高低，此法的结果不能用质量单位，只能用反应速度单位（μmol·min-1）来表示酶量的多少，并计算出一定体积（L）标本中酶的含量（活性单位数）。这种表示酶浓度的确切名称是酶的催化活性浓度，简称为酶活性浓度。
（2）酶活性单位有：①国际单位（在特定条件下每min催化1μmol底物转化的酶量）；②催量（katal，简称Kat）：它的定义是在最适条件下每s催化1mol底物转化的酶量。Kat对血清酶活性测定而言显得过大，故用μkatal或nkatal.两者可换算
1IU=1μmol·min-1=16.67nmol·s-1=16.67nkatal
84解释连续监测法。说明本法为什么要在线性反应期进行测定？
（1）连续监测法是指在适当的仪器上，在不终止酶反应的条件下，多点监测整个酶促反应过程中某一反应引起的产物或底物随时间变化的情况，在反应速度恒定期间，以单位时间酶反应初速度计算酶的活性浓度。由于本方法测定的是反应速率，故又名“速率法”；又由于测定是在酶促反应动态期进行的，故又称“动力学法”（也曾称为“动态法”）。但IFCC文件建议避免将本法称为“动态法”，而应称为“连续监测法”。我国卫生部临床检验中心亦推荐使用“连续监测法”。医学全.在线.网.站.提供
（2）酶促反应的线性反应期是指在最佳条件下，酶促反应速度保持恒定（零级反应期）的时间内进行的反应。此时反应产物的生成量与反应时间呈正比例，单位时间内吸光度的变化值亦与酶活性成正比例。这样就能保证测定结果较为准确可靠。
85解释非结合胆红素（Bu）、结合胆红素（Bc）和δ胆红素（Bδ）？
（1）非结合胆红素（Bu）是指游离胆红素，是血红素的代谢产物，分子式为C33H36N4O，分子量584.7，金黄色，不溶于水，易溶于有机溶剂，不与重氮试剂直接显色，是正常血清中的主要胆色素。
（2）结合胆红素（Bc）：在一分子非结合型胆红素的两个丙酸基侧链上结合二个葡萄糖醛酸残基即构成胆红素葡萄糖醛酸二酯，称为结合胆红素（Bc）。它是在肝细胞内合成的，是胆汁中的主要胆红素。水溶性，能与重氮试剂直接显色，无毒性。
（3）δ—胆红素（Bδ）：在长期高胆红素血症病人血浆中存在δ—胆红素。Bδ有两种形式：一种是脂型的Bδ，是一个丙酸基侧链以共价键与Alb结合，另一个丙酸基侧链结合着糖醛酸；未酯化型Bδ只有一个丙酸基与Alb结合。85%的Bδ能与重氮试剂直接显色。Bδ既不被肝细胞摄取。也不能被肾小球滤过，致使它在循环血液中有较长的停留时间。
86何谓肾清除率和内生肌酐清除率？说明其判断指标。
（1）肾清除率是指单位时间内（min）经肾小球滤出的血浆滤液量（ml/min）。
（2）内生肌酐清除率（ccr）是指单位时间（min）内，肾脏清除血浆内生肌酐的血浆体积，其结果以ml/min表示。
（3）内生肌酐清除率试验是判断肾小球滤过功能的敏感指标，其判断指标主要有：
①参考值：男105±20ml/min
女95±20ml/min
②初步估计肾小球滤过功能损害的程度：
若Ccr70——51ml/min轻度损害
50——31ml/min中度损害
<30ml/min重度损害
慢性肾功能衰竭的病人：
若Ccr20——11ml/min为早期肾功能衰竭
10——6ml/min为晚期肾功能衰竭
<5ml/min为终末期肾功能衰竭
③指导治疗：Ccr<30ml/min限制蛋白质摄入
<30ml/min噻嗪类利尿药治疗无效
く10ml/min应结合临床进行透析治疗
87解释Jaffe反应及“假肌酐”两个名词，并说明如何消除“假肌酐”对Jaffe反应的干扰？
（1）Jaffe反应是指血浆中的肌酐与碱性苦味酸盐反应，生成黄红色的苦味酸肌酐复合物的反应。
（2）Jaffe反应特异性不高，标本中的维生素C、丙酮酸、丙酮、乙酰乙酸、甲基多巴、高浓度的葡萄糖、蛋白质和一些抗菌素如青霉素G、头孢噻吩、头孢西丁、头孢唑啉等也都能与碱性苦味酸生成红色复合物。这些不是肌酐但能起显色反应的物质称为“假肌酐”。
（3）消除“假肌酐”干扰，主要采取两种办法：
①用吸附剂（硅酸铝或纯化漂白土）吸附或用离子交换树脂除去“假肌酐”。
②在速率法测定中，设置20S延迟期，即在样品与碱性苦味酸试剂混匀后的20—80S之间（此时期中肌肝与苦味酸反应占主导地位，称为“窗口期”进行测定，可得到较准确的测定结果。
88试述ApoAI、ApoB100和ApoCⅡ的合成部位及其主要功能？
（1）ApoAI由肝细胞合成，是HDL的主要结构蛋白，其功能是激活LCAT（卵磷脂胆固醇酰基转移酶），在胆固醇的逆向运转中起重要作用。
（2）ApoB100由肝脏合成，是LDL.VLDL的结构蛋白（肝脏合成的每一个VLDL颗粒中只含1分子apoB100，LDL由VLDL转变，每个LDL颗粒中只含1分子apoB100），也是LDL受体的配体。
（3）ApoCⅡ主要来源于肝脏。其主要功能是激活脂蛋白脂酶（LPL），启动LPL对乳糜微粒和VLDL中甘油三脂的水解反应。
89何谓基质效应？试述它对血脂测定结果准确性的影响。
（1）“基质”是指标本中除分析物以外的一切组份。对血清胆固醇测定而言，就是指胆固醇以外血清中的一切成份及其物理化学性质。
（2）“基质效应”是指：①标本中除分析物以外的其它成分对分析物测定值的影响；②基质对分析方法准确测定分析物能力的干扰。广义说来，基质效应也应包括已知的干扰物（如胆固醇测定中的胆红素、血红蛋白、抗坏血酸等都是干扰物），但目前只将基质效应限于生物材料中未知或未定性的物质或因素（如粘度、pH等）的影响。基质效应所致分析结果的偏差称为基质偏差（matrixbias）。
（3）基质效应对血脂测定结果准确性的影响：以总胆固醇测定为例，1979年由Cooper证实，在胆固醇酶法测定中，由于校准液与病人血清的反应性不同，可使总胆固醇的测定值偏低5%～7%.80年代也有不少报告指出校准液中的胆固醇用酶法测定回收率偏低。在甘油三脂、HDL-C及LDL-C酶法测定中也出现了不同程度的基质效应。因此采用定值人血清做校准物来克服基质效应对血脂分析结果准确性的影响是十分重要的。
90说明2.3-DPG对Hb与O2结合的影响？
2.3-DPG是2.3-二磷酸甘油酸的缩写，它是红细胞糖酵解支路的产物。在成熟红细胞内，2.3-DPG的含量在动脉血中为3400μmol/L，静脉血中为4940μmol/L，比糖酵解中间产物（如3—磷酸甘油酸等）高出数百倍。研究确定2.3-DPG在红细胞内有重要生理功能，即能降低Hb和O2的亲和力，促使HbO2释放O2以适应组织对氧的需求。
2.3-DPG在近中性pH环境中与Hb（脱氧血红蛋白）以等分子（1：1）结合，结合常数为105mol-1；但是它与HbO2（氧合血红蛋白）的结合常数相比只有前者的1/100，可见2.3-DPG主要与脱氧Hb结合。当它与HbO2的二条β链形成盐键结合后，使Hb变成T型（紧密型），降低了Hb与O2的亲和力，从而促进HbO2解离释放O2.这种作用在PO2较高的肺部影响较小，但血液流经组织时，红细胞内存在的2.3-DPG就发挥作用，使HbO2大量分解释放出O2、供组织利用。
91何谓Bohr效应？说明其发生的机理及生理意义。
（1）Bohr效应：血液pH对Hb与O2亲和力的影响称为Bohr效应。
（2）Bohr效应的发生机制与pH改变引起Hb构象改变有关。即当H+浓度增加或PCO2增加时，可促进Hb的a链氨基端缬氨酸的氨基和a链122、β链146组氨酸残基的异咪唑基与H+结合，使其带正电荷，从而促进盐键的形成，使Hb变成T型（紧密型）结构，导致Hb对O2的亲和力降低。反之，盐键断裂，Hb变成R型（松弛型），增大了Hb对O2的亲和力。医学 全在.线提供
（3）Bohr效应具有重要生理意义：当血液流经肺部时，CO2从血液向肺泡扩散，血液PCO2下降，[H+]也降低，均使Hb对O2的亲和力增加，氧离曲线左移，在任一PO2下Hb氧饱和度增加，血液运氧量加大；当血液流经组织时，CO2从组织进入血液，血液PCO2和[H+]升高，Hb对O2亲和力降低，曲线右移，促进HbO2解离向组织释放更多的O2.
92什么是Porter—Silber反应和Zimmermann反应？说明它们的用途？
（1）Porter和Silber的比色法是测定尿17羟类固醇（17-OHCS）的常用方法。用提取剂提取酸性尿（pH2.4～2.6）中的17-OHCS，在提取相中加入Porter-Silber试剂，在60℃水浴中保温30min.完成Porter-Silber氏颜色反应。此反应的实质是17-OHCS与盐酸苯肼的硫酸溶液作用，生成一种能产生黄色腙的21-醛），通过与同样处理标准比色，计算出尿液中17-OHCS的含量。
（2）Zimmermann反应是测定尿中17-酮类固醇（17-KS）的方法学基础。尿中17-KS结合物在酸性（pH2.0）环境中，经加热水解，用乙醚提取水解后游离的17-KS，洗涤后使17-KS与碱性间二硝基苯反应，生成特征性紫色反应，即Zimmermann反应。
93什么是OCV和RCV？说明实验室进行OCV和RCV的工作条件？
（1）OCV是“最佳条件下的变异”的英文缩写。它表示本室在目前条件下该检验项目所能达到的最好的精密度水平。各种不同方法中OCV的测定必须遵循一条基本原则，即OCV的测定应使用与常规工作相同的检验方法、试剂和仪器。但对仪器必须重新进行校正；试剂应新鲜配制并进行标定；由技术熟练的工作人员操作；在全部测定过程中应严格控制温度、光照、反应时间等一切可能影响检验结果的因素，并正确的计算检验结果。
（2）RCV是“常规条件下的变异”的英文缩写。它表示本室目前条件下，常规工作中该检验项目的精密度水平。做RCV的基本要求是把质控样品完全当病人标本，每天由作常规检验的操作者随同病人样品同批测定，而不要有任何特殊照顾，以便能真实反映常规检验的精密度。
94什么是任选式全自动生化分析仪？在生化自动分析工作中采取哪些抗交叉污染的措施？
（1）任选式全自动生化分析仪具有在一个通道中任意选择测定多种项目（一般可高达60项以上）。所谓任选有两种方式。其一是输入样品的顺序，测定完一个样品的所有项目后再做下一个样品。另一种方式是按做批量测定的方式，将输入的所有样品按欲测项目进行组合分类。相同的项目一起测定，测完一种项目再测另外一种项目。
（2）全自动生化分析仪在工作中防止交叉污染的主要措施有：
①加样探针、试剂探针的自动清洗与冲洗功能；
②比色皿的自动冲洗功能；
③自动光扫描比色皿，剔除不合格的比色皿；
④计算机自动降低具有相似测定方法的测定项目间的交叉污染概率。
95解释真值、误差、精密度和准确度？
（1）真值：标本中被测物的真实浓度称为真值。
（2）误差：误差是实验误差的简称，是某量值的给出值与其客观真值之差。
（3）精密度：精密度是表征测定结果中随机误差大小程度的指标，即同一标本在一定条件下多次重复测定所得到的一系列单次测定值的符合程度叫做精密度。
（4）准确度：准确度是指测定结果与真值接近的程度。准确度主要受测定系统中系统误差的支配（系统误差越小准确度越高），也受随机误差的影响。所以准确度是表示测定结果中系统误差和随机误差的综合。
96如何区分一个分析方法的特异性差和受干扰物质的干扰？举例加以说明。
（1）某些非分析物与试剂发生反应，影响了测定结果的准确性，说明该方法特异性差。例如在用溴甲酚绿法测定血清白蛋白（Alb）时，BCG除了与Alb发生“快反应”外，还与血清中的a1酸性糖蛋白、转铁蛋白、触珠蛋白、C反应蛋白和铜蓝蛋白等进行所谓的“慢反应”，使该法Alb测定值偏高，表明BCG方法用于血清白蛋白测定时其特异性差。
（2）所谓干扰是指某些非分析物改变了被测定物和试剂间的反应，从旁影响了分析物被该方法检测的正确度。例如在GOD—PAP法测定葡萄糖的试验中，维生素C、尿酸等还原性物质也能使H2O2还原，导致血糖测定结果偏低。
97解释PCR、DNA—PCR、RT—PCR、原位PCR和定量PCR？
（1）PCR是聚合酶链反应（Polymerasechainreaction）的英文缩写，是近年来发展起来的一种在体外特异扩增某一目的DNA片段的技术。
（2）DNA—PCR：以DNA为模板，扩增特定核苷酸序列。主要用于检测特定基因或DNA片段的存在，并常与核酸分子杂交结合，分析检定基因突变。
（3）RT—PCR：用提取的mRNA或总RNA（含有mRNA）为模板，通过逆转录扩增cDNA.是检测特定基因表达水平的主要方法之一，也是用于鉴别、诊断RNA病毒的重要技术。
（4）原位PCR：与原位杂交一样，原位PCR也无需提取DNA/RNA，直接用组织切片和细胞进行PCR或RT—PCR.它既能鉴定含有靶DNA/RNA序列的细胞，又能确定靶DNA/RNA序列在细胞内或染色体上的位置。
（5）定量PCR：PCR产物经凝胶电泳分离转移膜上，与放射性核素或化学发光标记的核酸探针杂交。根据放射自显影或化学发光后底板爆光的强弱，用密度计扫描定量。此法在基因诊断中应用甚广。
98简述胆固醇在体内的转化途径。
（1）转变为胆酸和脱氧胆酸；
（2）合成胆固醇脂；
（3）在肠道内转变为粪固醇随粪便排出体外；
（4）合成皮质类固醇和性激素；
（5）转变为维生素D.
99试列举五种主要在肝脏进行的代谢。
（1）可利用糖原提供血糖；
（2）进行糖异生；
（3）在脂类代谢过程中生成酮体；
（4）尿素的生成；
（5）进行生物转化作用。
100试述α1-微球蛋白（α1-m）、β2-微球蛋白（β2-m）的生化特点及其测定对早期肾损伤的诊断价值？
（1）α1-m：α1-m是一种糖蛋白（含糖量为20%），分子量较小（3KD），pI4.5~5.0.α1-m由肝脏产生。血液中的α1-m有游离型和与IgA结合型两种存在形式，其游离型可通过肾小球滤过，绝大部分在肾小管重吸收降解，故在各类肾病引起的肾小球滤过功能降低时，血清α1-m浓度升高。此时血清α1-m浓度与血清肌酐、血尿和β2-m等呈正相关（r=0.7以上）。
（2）β2-m：β2-m存在于除红细胞和胎盘滋养层细胞以外所有有核细胞，尤其在单核细胞和淋巴细胞中含量丰富，在免疫应答中起重要作用。β2-m分子量约为11.8KD，由100个氨基酸组成的单链多肽，pI5.70.它可被肾小球滤过，肾小球的滤过系数达0.90，又可被近端肾小管全部重吸收降解。血中β2-m的半衰期为1.8h.血中β2-m浓度主要受肾小球滤过功能的影响。故血清β2-m能早期判断肾小球滤过功能，较测定血清肌酐更灵敏。肾移植成功后血清
β2-m很快下降，当发生排斥反应时，由于肾滤过率下降，并且因排斥引起淋巴细胞增多（β2-m合成增多），血清β2-m常增高。
