1.血红蛋白量：ICSH，1978年，1996年。NCCLS和ICSH均推荐的参考方法，测定溶解红细胞中血红蛋白转化成氰化高铁血红蛋白的吸光度。
    2.血细胞压积：ICSH，1980年，2001年。ICSH参考方法采用Wintrobe管，纠正残留血浆。NCCLS采用微量管，不纠正残留血浆。因为在口径小的试管中残留血浆少，两者之间差约1%左右。
    3.白细胞分类计数：NCCLS，1992年。NCCLS白细胞分类参考方法H20-A，用Romanowsky染色，镜下分析400个白细胞。
    4.红细胞计数，ICSH，1994年。红细胞计数参考方法用特定的半自动血细胞计数仪，测定固定容量的颗粒数（利用Coulter ZBI的电子细胞计数仪符合该标准）。用等渗缓冲生理盐水作1/50000倍稀释，测量和纠正重合误差。
    单通道计数仪，能用于检测通过小孔的红细胞、白细胞，小孔为100µm和70µm，其长度：直径比率为1。用水平压力计控制稀释细胞悬液的流量为1ml，与脉冲分析仪连接，设置阈值下限，微型计算机采集数据纠正重合误差。对于新鲜血和乳胶颗粒重复测定精度可达0.35%。
    5.白细胞计数：ICSH，1994年。用Coulter ZBI法计数。只作一次稀释，加入Zapoglobin后在1-5分钟内计数。
     6.血小板计数：ICSH，2001年。用流式细胞仪法，间接法计数血小板。采用EDTA抗凝全血，加特异性荧光标单抗（CD41和CD61）染色血小板，被染色血小板在流式细胞仪上根据荧光强度和散射光，得出PLT和RBC比率，通过准确计数RBC，就可算得准确的血小板值。计数至少50000个血小板，精度可达2%。用血细胞计数盘直接计数血小板的方法，因为计数盘误差为1%，若计数500个血小板，精度为5%。
    目前，稳定参考品仍然未定。ACD或CPD抗凝血液可作为控制品，室间质评样品和短期校准品。因只能稳定数周，不符合国际参考标准的基本性能。另一方面，固定血细胞能稳定数年，但其密度、变形性、形态和流变性能会影响它们在计数系统中的行为，需形状因子纠正才能与新鲜血有可比性。“形状因子”主要影响红细胞，新鲜红细胞在通过计数系统时，呈纺锤形，而固定红细胞呈铜钱形。但是，计数系统中，新鲜白细胞和血小板保持球形，固定也不影响形态，其形状因子为1.0。稳定胶乳颗粒有同样的局限性，优点是可根据颗粒的特定大小生产单一的颗粒，且标准差极小。ICSH和欧盟参考BCR标准局建立了3批特别精度的胶乳颗粒，在显微镜下，用经校准标尺测得直径分别为2.23,4.8和9.445µm,呈球形，计算体积为5.8,58和441fL，此物质能直接溯源到一级长度计量标准。在颗粒计数仪中，形状因子由真实体积和测定体积的差异得出。结果见表2。
表2　参考仪器和常规仪器的形状因子计算

计算体积（fL）	参考仪器（fL）	常规仪器（fL）	形状因子（fL）
5.8	5.74	5.67	1.0
58	76	76	1.3
441	超出范围	超出范围

理论上，胶乳制剂能用于校准一级参考仪器，然后用于新鲜血液或稳定血液的定值。以此调节所有计数仪，给出可比结果，所用校准品必须溯源到一级参考标准。国际上，测量结果的溯源链模式如下图左(图略)。在血液细胞计数方面，生产厂家的校准品溯源链模式如下图右(图略)。

（一）仪器的校准方法

    现代血液分析仪的校准在操作手册中都有严格的方法，在校准前，必须确认仪器分析性能，包括精度、线性、交叉污染等指标。采用新鲜血或稳定血液校准时，应考虑不同的影响因素，分述如下。

1.新鲜血液作为校准品
    以新鲜血液作为校准品，其值必须用参考方法或选择性方法来确定。尤其是血液的新鲜程度，将明显影响校准结果。其次，根据校准准确度要求，为了减少随机误差，达到校准，必须采用足够数量的标本。表3显示了标本数量和校准准确度之间关系。

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