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第四节 高效液相色谱法
1、 基本原理：影响柱效的主要因素是涡流扩散和传质阻抗。
分类：1、液固吸附色谱法：流动相为液体，固定相是固体吸附剂。
2、液--液分配色谱法：固定相几乎全是化学键合硅胶，又称化学键合相色谱法。
按固定相和流动相的极性2又分：正相色谱法和反相色谱法
正相色谱法：流动相极性小于固定相极性的色谱法。用于分离溶于有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质，用于含有不同官能团物质的分离。 极性弱组分先流出
反相色谱法：……………大于……………………… 用于分离非极性至中等极性的分子型化合物
2、 高效液相色谱仪：
1、高压输液泵 2、色谱柱 3、进样阀
4、检测器：紫外吸收检测器、荧光检测器、差示折光检测器、电化学检测
中国药典2000对高效液相色谱法规定：除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意更改外，其余均可适当改变，色谱图于20min内记录完毕。
第5节 色谱系统适用性试验和定量分析方法
一、系统适用性试验
1、 色谱柱的理论板数：
2、 分离度：应大于1.5
3、重复性
3、 拖尾声因子：0.95-1.05之间
二、定量测定法：
1、内标法加较正因子测定供试品中某个杂质或主成分含量
2、外标法测定供试品中某个杂质或主成分含量
3、加较正因子的主成分自身对照法
不加较正因子的主成分自身对照法
第六节 电泳法
电泳法：在电场的作用下，依据各组分之间淌度的不同实现分离的方法。分离程度取决于淌度之差。
一、基本原理： 电泳迁移速度为： ：电泳淌度 ：电场强度
影响电泳分离的条件：1、缓冲液的PH值和离子强度 2、电场强度 3、样品浓度
二、电泳仪：
3、 各类电泳法：
(1)、纸电泳法 (2)、醋酸纤维素电泳法：主要用于测定蛋白质相对百分含量
(3)、琼脂糖凝胶电泳法： (4)、聚丙烯酰胺凝胶电泳法
(5)、SDS聚丙烯胺凝胶电泳法：测定蛋白质的分子量
四、毛细管电泳法简介：以弹性石英毛细管为分离通道，高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分之间的淌度和分配行为上的差异而实现分离的分析方法。
第八章 其他方法
第一节 PH值测定法
PH计：包括PH测量电池和PH指示器。
1、 PH计工作原理：两次测量法
2、 PH值测定方法：
1、PH-mV选择：
2、温度补偿：25℃时改变一个PH单位，电动势改变59mV，15℃时改变57mV。
3、仪器校正(定位)和核对：用标准PH缓冲液校准，用定位调节钮使PH读数与标准液一致。
4、测定：中国药典2000规定五种标准液 25℃时为：1.68 ，4.00，6.86，7.41，9.18 。
3、 注意事项：
1、测定前选相差3个单位的标准缓冲液，使供试品处于二者之间。
2、取较接近的一种进行校正，使仪器与表列数值一致。
3、用第二种核对时，误差应不大于 0.02 PH单位 。重复 否则检查仪器或更换电极。
4、电极用水充分洗涤吸干。
5、弱缓冲液的测定先用邻苯二甲酸氢钾校正仪器，再用硼砂，直至1分内不超过 0.05单位。
第二节 氧瓶燃烧法
1、 基本原理：将有机物放入充满氧气的燃烧瓶中进行燃烧。
2、 仪器装置和设备3、 ：
磨口硬质玻璃锥形瓶 固体样品：无灰滤纸 液体样品：纸袋
吸收液：多数水或水--氢氧化钠的混合液，少数水--氢氧化钠--浓过氧化氢混合液、或硝酸溶液
4、 燃烧操作法
5、 注意事项 产生烟雾：碘：紫色 溴：红棕色 氟、氯：白色 测定氟化氢用石英制燃烧瓶
6、 应用：有机卤素、硫、磷及硒等杂质的检查。
第三节 脂肪与脂肪油的测定法
相对密度系指在相同的温度、压力条件下，某种物质的密度与水的密度之比，温度为20 C 。
液体相对密度用比重瓶进行测定，易挥发液体的相对密度用韦氏比重秤测定 。
第四节 X-射线衍射法
粉未衍射是结晶物质鉴别和纯度检查最常用技术，单晶衍射主要用于分子量和晶体结构的测定。
第五节 热分析法
1、 各类热分析法：
1、热重法：测量物质质量与温度关系的一种技术。
2、差热分析法：测量待测物质和参比物的温度差。
3、差示扫描量热法：测量输给待测物质和参比物的能量差与温度(或时间)关系的一种技术 。
第九章 药物的杂质检查
第一节 杂质和杂质限量检查
1、 药物的纯度：指2、 药物纯净的程度。
3、 药物中杂质的来源：生产过程中引入和贮藏过程中产生。
4、 杂质的限量检查：药物中所含杂质的最大允许量称杂质限量 。
第二节 一般杂质的检查方法
1、 氯化物的检查：利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，2、 生成氯化物的白色混浊比色。
以50ml中含硝酸10 ml为宜。以内消法消除颜色干扰。
3、 硫酸盐检查法：是利用 SO 与氯化钡在盐酸酸性溶液中生成硫酸钡的白色浑浊液，4、 比较。
加盐酸防碳酸钡或磷酸钡沉淀生成，50ml中含稀盐酸2 ml ，PH =1 。内消法
5、 铁盐检查法：中国药典采用硫氰酸盐法检查药物中的铁盐杂质。铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成可溶性硫氰酸铁配位离子，6、 比较。50ml中含稀盐酸4 ml为宜。
7、 重金属检查法：指8、 在实验条件下能与S 作用显色的金属杂质，9、 以铅为代表。药典收载四法：
第一法：硫代乙酰胺法：用醋酸铅缓冲液(PH 3)，以硝酸铅配制标准铅贮备液，用外消色法。
用于在实验条件下供试品澄清、无色、对检查无干扰或经处理后对检查无干扰的药物。
第二法：是将供试品炽灼破坏后检查或取炽灼残渣下遗留的残渣进行检查的方法。用于水、乙醇中难溶或能与重金属离子形成配位化合物而干扰检查的有机药物。500---600 C
第三法：用于难溶于稀酸但能溶于碱性水溶液(磺胺类、巴比妥类) NaOH +水+NaS
第四法：微孔滤膜法。形成铅斑比较。
10、 砷盐检查法：
(一)古蔡法：加入碘化钾与氯化亚锡将五价砷还原为三价砷，抑制锑化氢生成。醋酸铅棉花吸收硫化氢。
含锑药物：改用白田道夫法检查，加少量二氯化汞提高反应灵敏度。
(二)二乙基二硫代氨基甲酸银法(Ag-DDC法)：
原理：砷化氢与Ag-DDC吡啶溶液作用，使Ag-DDC中银还原为红色胶态。
11、 酸碱度的检查：检查药物的酸碱性杂质。所用水为新沸放冷至室温的水。
1、酸碱滴定法 2、PH值法 3、指示剂法
七、溶液颜色检查法：控制药物中有色杂质的含量。 1、对照比色 2、分光光度法
八、易炭化物检查法：检查药物中遇硫酸易炭化或易被氧化而呈色的微量有机杂质。
九、澄清度检查法：检查药物中微量不溶杂质，用作注射剂的原料药一般作此项检查。药典 0.5号。
十、炽灼残渣检查法：检查有机药物中混入的各种无机杂质。 一般为 0.1-0.2%
十一、干燥失重测定法：经干燥所减失的重量，主要为水分，也包括其他挥发性物。
1、 常压恒温干燥法：连续两次差异0.3mg以下，2、 继续1h，3、 105 C
4、 干燥剂干燥法：受热易分解或挥发药物，5、 干燥剂有硅胶、浓硫酸、二氧化二磷。
6、 减压干燥法：适用于低熔点，7、 受热不8、 稳定或水分难赶除的药物。
第三节 特殊杂质的检查方法
一、直接检查：
二、显色法和沉淀法：利用杂质与一定试剂反应产生颜色与沉淀进行检查 。
三、容量分析法：通过消耗滴定液的体积不超过一定量来控制。
5、 旋光度法：利用杂质与药物旋光性质不同6、 检查。
7、 分光光度法：紫外分光光度法、红外分光光度法(用于药物中无效或低效晶型的检查)
8、 色谱法：分离后再检查
1、薄层色谱法：(1)杂质对照品法 (2)高低浓度对比法
2、纸色谱法：用于极性较大的药物的杂质的检查
3、高效液相色谱法：分离效能高，应用广。
4、气相色谱法：用于药物中挥发性杂质的检查，如残留的溶剂。
第十章 醇、醚、醛类药物的分析
第一节 醇类药物的分析
典型药物有乙醇、甘油、二巯丙醇和山梨醇。
1、 主要鉴别试验
(1) 碘仿反应：乙醇在碘液中氧化成甲酸盐，(2) 有碘仿臭气并见黄色碘仿沉淀。
(3) 丙烯醛反应： 甘油：与硫酸氢钾发生丙烯醛的刺激性臭气。二巯丙醇与碳酸钠类似反应。
(4) 沉淀反应：二巯丙醇与醋酸铅----黄色沉淀。
二、含量测定：
(1) 碘量法：二巯丙醇有强还原性，(2) 用碘量法直接测定。
(3) 高碘酸钠(钾)法：山梨醇和山梨醇注射液的含量测定。
第二节 醚类药物的分析
麻醉乙醚有如下检查项目：
1、酸度：醋酸量，易刺激呼吸道。 2、醛类：具刺激性，麻醉时分泌物增加。
3、过氧化物：贮备过程中易产生，二羟乙基过氧化物。
4、异臭：原料乙醇中引入的杂醇油 5、不挥发物
第三节 醛类药物的分析
包括甲醛溶液、水合氯醛、乌洛托品。
1、 鉴别试验：
(1) 甲醛的鉴别：具还原性，(2) 能还原具氧化性的金属盐类。能还原氨制硝酸银溶液，(3) 生成银镜。
(4) 水合氯醛的鉴别：加水溶解，(5) 加碱试液浑浊，(6) 加温成澄明两层液，(7) 产生氯仿臭气。
(8) 乌洛托品的鉴别：加稀酸加热，(9) 分解成甲醛和铵盐，(10) 遇氨制硝酸银成黑色金属银。
2、 含量测定：
(1) 氧化后剩余滴定法：甲醛碱性被氧化
(2) 碱水解后银量法：水合氯醛测定法
(3) 酸水解后剩余滴定法：乌洛托品的定量分析
第四节 酮类药物的分析
一、概述：含量测定：扑米酮(氮测定法)、吡喹酮(高效液相色谱法)、富马酸酮替芬(非水溶液滴定法)
二、鉴别反应：扑米酮：1、遇酸分解，生成甲醛，与变色酸水浴中共热，显紫色。
2、与无水碳酸钠混合，加热炽烧，分解生成氨气，使红色石蕊试纸变蓝色。
3、 含量测定：(一)非水溶液滴定法：富马酸酮替芬
(二)高效液相色谱法：吡喹酮
第十一章 芳酸及其酯类药物的分析
第一节 水杨酸类药物的分析
1、 化学性质：对氨基水杨酸钠溶于水，2、 其他不3、 溶。
本类药物易水解，阿斯匹林检查水杨酸，对氨基水杨酸钠检查间氨基酚中间产物。
结构：
4、 鉴别试验：
(一)、三氯化铁反应：水杨酸及其盐：在PH4-6，与三氯化铁反应，阿----紫堇色；对----紫红色 。
(二)、水解反应：阿司匹林与碳酸钠加热水解，加过量稀硫酸，析出水杨酸白色沉淀。
(三)、重氮化--偶合反应：对氨基水杨酸钠(具芳伯胺基)---橙红色沉淀。
(四)、红外吸收光谱：水杨酸、贝诺酯、对氨基水杨酸钠。
5、 阿司匹林的杂质检查和含量测定：
检查： 1、溶液的澄清度：碳酸钠试液中的不溶物，碳酸钠试液中应澄清 。
2、水杨酸：水杨酸酚羟基与高铁盐作用生成紫堇色。对色比较不得更深。
3、易炭化物：检查被硫酸化呈色的低分子有机杂质。
2000规定阿片(0.3%)，阿肠溶片(1.5%)以比色法控制水杨酸量，阿栓中游离酸(1.0%)以高效液相。
含量测定：1、中和法：直接滴定法(用乙醇不溶剂) 两步滴定法：用于片和肠溶片测定
2、高效液相色谱法：用于阿司匹林栓剂的含量测定。
6、 对氨基水杨酸钠的特殊杂质检查和含量测定：
(1) 间氨基酚杂质的产生及其检查方法：
间氨基酚导致变色，有毒。对X不溶于乙醚，间X溶于乙醚，两者分离，用Hcl滴定。
(2) 含量测定：芳伯胺基，(3) 酸性中用亚硝酸钠滴定法(重氮化法)，(4) 永停法指(5) 示终点。
第二节 苯甲酸类药物的分析
苯甲酸钠含量测定：与盐酸生成苯甲酸，
双相滴定法：苯甲酸易溶于水，水液呈碱性，用水-乙醚溶剂系统，用盐酸滴定。
第三节 其他芳酸类药物的分析
1、 化学结构与鉴别试验：
氯贝丁酯分子中酯结构与盐酸羟胺及三氯化铁作用，形成有色异羟肟酸铁，显紫色。
紫外特征吸收和红外光谱均可 。
2、 杂质检查：中间产物对氯苯氧异丁酸，3、 控制酸度
1、 酸度：制备2、 中盐酸硫酸。
3、 对氯酚：合成起始材料对氯酚，4、 用气相色谱法检查。
5、 挥发性杂质：合成过程中，6、 用气相色谱法。
4、 两步滴定法：测定含量。
第十二章 胺类药物的分析
第一节 芳胺类药物的分析
1、 基本结构与化学性质：
(一)盐酸普鲁卡因：
1、 芳伯氨基特征：重氮化偶合反应
2、 酯键易水解：光、热、碱，3、 产物为对氨基苯甲酸(PABA)。
4、 游离碱难溶水且碱性弱：非水滴定法，5、 亚硝酸钠法测定含量。
(二)对乙酰氨基酚：
1、水解产物呈芳伯氨基特性：酸性中易水解
2、水解产物易酯化：水解后产生醋酸
3、与三氯化铁呈色： 紫外、红外、均可
2、 鉴别试验：
1、 重氮化偶合反应：盐酸普鲁卡因、对乙酰氨基酚(水解成对氨基酚)
2、 三氯化铁反应：对乙酰氨基酚水液加三氯化铁显蓝紫色。
3、 水解产物的反应： 4、红外吸收光谱
3、 对乙酰氨基酚的杂质检查：
1、 乙醇溶液的澄清度与颜色：检查中间体对氨基酚的有色氧化产物。
2、 有关物质：药典用薄层色谱法检查对氯乙酰苯胺。
3、 对氨基酚：中间体或水解产物，4、 毒性大。有芳胺反应，而5、 对乙酰氨基酚没有。
4、 盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查：药典规定检查水解产物对氨基苯甲酸小于1.2%。
5、 含量测定：
(一)、亚硝酸钠滴定法：有芳伯氨基的药物(普)以及水解后有芳伯氨基的药物(对)均可测定。
测定条件：1、加入溴化钾(2g)：加速反应。
2、加入强酸加速反应：反应加快、重氮盐酸性中稳定、防偶氮氨基化合物生成。
3、室温10---30 C 温度太高，亚硝酸逸出
4、滴定管尖端插入液面下滴定：避免滴定过程中亚硝酸挥发和分解。
(二)、紫外分分光度法：对乙酰氨基酚
第二节 苯乙胺类药物的分析
1、 基本结构与典型药物：肾上腺素
2、 鉴别试验：
1、 三氯化铁反应 ： 2、氧化反应：盐酸异丙肾上腺素偏酸性下与碘迅速氧化。
3、甲醛--硫酸反应 ： 4、紫外特征吸收与红外吸收谱：
3、 酮体检查：四种都需检查酮体，4、 酮体在310nm处有最大吸收，5、 小于0.06% 。
6、 含量测定：
(一)非水溶液滴定法：冰醋酸为溶剂，醋酸汞消除氢卤酸干扰，结晶紫指示终点。三种
(6) 溴量法：盐酸去氧肾上腺素及注射液用此法。
要点：防游离溴及碘逸出，溴过量2%，空白试验。
第三节 氨基醚衍生物药物的分析
1、 基本结构与性质：遇光分解
盐酸苯海拉明：
2、 鉴别试验：
1、 与硫酸反应显色：二苯甲氧基反应 2、水解反应：遇酸水解生成二苯基甲醇
3、与硝酸银反应形成沉淀 ： 4、紫外红外吸收光谱
三、含量测定：
1、非水溶液滴定法：~原料药为盐酸盐，冰醋酸中加醋酸汞后与高氯酸生成苯海拉明高氯酸盐 ，不能用于片剂测定，受硬酯酸镁干扰。
2、 酸性染料比色法：为分光光度法，3、 灵敏度高。片剂含量测定及片剂溶出度的测定。
实验关键要有合适PH，提取是否完全，要求高。
4、 阴离子表面活性剂滴定法：容量分析法，5、 准确度高，6、 用于注射液的含量测定。
第十三章 巴比妥类药物的分析
第一节 基本结构与性质
一、 基本结构：
巴比妥类：
二、特性：1、弱酸性：水液显酸性，与强碱成盐，盐类水液显碱性，加酸后析出游离巴比妥类沉淀。
2、易水解：酰亚胺基团与碱液共沸放出氨气，使红色石蕊试纸变蓝。
3、易与重金属离子反应：产生有色沉淀。用于鉴别和含量测定。
4、具紫外特征吸收：酸性不电离，无明显吸收，碱性电离，有吸收。
第二节 鉴别试验
一、 丙二酰脲类反应：药典下银盐与铜盐反应
1、 与银盐反应：在碳酸钠溶液中加入硝酸银试液生成白色沉淀----溶解。
2、 与铜盐反应：在吡啶溶液中与铜吡啶试液作用，3、 生成配位化合物，4、 显紫色。硫喷妥显绿色。
二、熔点测定：异戊巴比妥钠和注射用硫喷妥钠的鉴别方法均采用熔点测定法。
3、 钠盐的鉴别反应：附录中一般试验项下
1、 焰色反应：显鲜绿色 铂丝烧红，2、 浸入盐酸，3、 反复4、 。
5、 与醋酸氧铀锌6、 反应：生成黄色沉淀
4、 取代基或元素反应：
1、 芳环取代基反应： (1)与亚硝酸钠-硫酸反应：橙黄色-橙红色 有苯环取代基
(2)与甲醛-硫酸的反应：生成玫瑰红色环 有苯环取代基
2、 不3、 饱和烃取代基反应：司可巴比妥含丙烯基，4、 使碘试液棕黄消失 。
5、 硫元素反应：NaOH试液中与铅离子反应，6、 生成白色沉淀---黑色硫化铅。
第三节 检查
一、苯巴比妥中特殊杂质检查：1、酸度 2、乙醇溶液的澄清度 3、中性或碱性物质
二、溶出度：苯巴比妥和异戊巴比妥片检查溶出度
第四节 含量测定
一、银量法：异戊巴比妥及其钠盐、苯巴比妥及其钠盐
采用甲醇---3%无水碳酸钠溶剂系统，用甲醇溶解，新鲜配制无水碳酸钠，照电位滴定法，用硝酸银滴定。 银---玻璃电极 临用硝酸浸洗1-2分。
二、溴量法：司可巴比妥含丙烯取代基与溴发生加成反应
三、紫外分光光度法：注射用硫喷妥钠含量测定采用对照品比较法 </P< p>
第十四章 磺胺类药物的分析
第一节 结构、性质和鉴别试验
一、结构与性质：都是对氨基苯磺酰胺的衍生物
磺胺嘧啶(SD) 磺胺甲 唑(SMZ)
2、 鉴别试验：
1、芳伯氨基的反应：(1)重氮化偶合反应 (2)与芳醛的缩合反应：酸液中成有色希夫氏碱
2、与硫酸铜成盐：磺酰胺上的氢原子有酸性，和金属离子成难溶性沉淀。呈色不同鉴别
3、N 取代基的反应：含氮杂环与有机碱沉淀剂沉淀。
7、 红外分光光度法
第二节 含量测定
一、原料药和普通制剂的含量测定 ：亚硝酸钠滴定法
二、溶出度的测定：以盐酸溶液为释放介质，紫外分光光度法测吸收系数。
3、 复4、 方磺胺制剂的含量测定：
1、双波长分光光度法：90版测定复方磺胺制剂的含量
2、高效液相色谱法：美国药典用此法测定含量
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