紫外可见分光光度法 一、基本原理紫外--可见分光光度法:是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。操作简单、准确度高、重现性好。波长长(频率小)的光线能量小,波长短(频率大)的光线能量大。 100nm 200nm 400nm 800nm 400um 1m 通指 X-射线 紫外区 可见区 红外区 微波区 无线电波区 Beer-lambert定律: A=E l c A--吸收度 E-吸收系数 l ---液层厚度 c---溶液浓度吸收度浓度与厚度的关系。是吸收光度法的基本定律,重要前提是单色光。 摩尔吸收系数:指在一定波长下,溶液浓度为1mol/L , 厚度为1cm时的吸收度,用 表示。百分吸收系数:指在一定波长下,溶液浓度为1%(W/V) , 厚度为1cm时的吸收度,用 表示。 影响Beer定律因素:化学因素,光学因素 二、紫外--可见分光光度计: 主要部件: 1、 光源:要求光谱的光源, 2、 氢灯和钨灯(350nm) 3、 单色器:进口狭缝、准直镜、色散元件(棱镜和光栅)、聚焦透镜和出口狭缝组成。 4、 吸收池:用光学玻璃制成的吸收池, 5、 只能用于可见光区。用熔融石英(氧化硅), 6、 可见紫外光区。医.学.全.在.线网站www.lindalemus.com 7、 检测器:光电池:(硒光电池:用于可见光;硅光电池:紫外可见光) 内阻小,光电管:内阻高,电流易放大 。 8、 易疲劳。 9、 讯号处理和显示器 三、定性与定量方法: (一)、定性鉴别:是多数有机化合物具有吸收光谱特征。一般用对比法。 1、对比吸收光谱特征数据 2、对比吸收度(或吸收系数)比值 3、对比吸收光谱的一致性 (二)、纯度检查:杂质检查与杂质限量检测 (三)、含量测定: 1、吸收系数法 2、标准曲线法 3、对照法
荧光分析法荧光分析法:利用荧光的物理特性而进行定性与定量测定的方法。荧光法比紫外可见灵敏。荧光光度计:激发光源、样品池、检测器、滤光片和单色器。医学全在线www.lindalemus.com
红外分光光度计红外线:波长大于0.76um,小于500um的电磁波。 Hooke定律来描述分子的伸缩振动。当分子的振动频率与入射的红外频率相同时,分子对红外产生吸收。伸缩振动和弯曲振动。基频峰:分子吸收一定频率的红外线,振动能级由基态(V=0)跃迁至第一激发态时产生的吸收峰。倍频峰:振动能级由基态跃至第二、三激发态。统称泛频峰。吸收峰:用于鉴别官能团存在的吸收峰称特征吸收峰。指纹区:1250-400cm (8.0-25um)的低频区称为指纹区。红外分光光度计主要部件:光源、吸收池、单色器(棱镜和光栅)和检测器(真空热电偶)及记录装置。
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