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第六章 分光光度法
第一节 紫外可见分光光度法
一、基本原理
紫外--可见分光光度法：是根据物质分子对波长为200-760nm这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。操作简单、准确度高、重现性好。
波长长(频率小)的光线能量小，波长短(频率大)的光线能量大。
100nm 200nm 400nm 800nm 400um 1m
通指
X-射线 紫外区 可见区 红外区 微波区 无线电波区
Beer-lambert定律： A=E l c A--吸收度 E-吸收系数 l ---液层厚度 c---溶液浓度
吸收度浓度与厚度的关系。是吸收光度法的基本定律，重要前提是单色光。
摩尔吸收系数：指在一定波长下，溶液浓度为1mol/L , 厚度为1cm时的吸收度，用 表示。
百分吸收系数：指在一定波长下，溶液浓度为1%(W/V) , 厚度为1cm时的吸收度，用 表示。
影响Beer定律因素：化学因素，光学因素
二、紫外--可见分光光度计： 主要部件：
1、 光源：要求光谱的光源，2、 氢灯和钨灯(350nm)
3、 单色器：进口狭缝、准直镜、色散元件(棱镜和光栅)、聚焦透镜和出口狭缝组成。
4、 吸收池：用光学玻璃制成的吸收池，5、 只能用于可见光区。用熔融石英(氧化硅)，6、 可见紫外光区。
7、 检测器：光电池：(硒光电池：用于可见光；硅光电池：紫外可见光) 内阻小，8、 易疲劳。
光电管：内阻高，电流易放大 。
9、 讯号处理和显示器
三、定性与定量方法：
(一)、定性鉴别：是多数有机化合物具有吸收光谱特征。一般用对比法。
1、对比吸收光谱特征数据 2、对比吸收度(或吸收系数)比值 3、对比吸收光谱的一致性
(二)、纯度检查：杂质检查与杂质限量检测
(三)、含量测定：
1、吸收系数法 2、标准曲线法 3、对照法
第二节 荧光分析法
荧光分析法：利用荧光的物理特性而进行定性与定量测定的方法。荧光法比紫外可见灵敏。
荧光光度计：激发光源、样品池、检测器、滤光片和单色器。
第三节 红外分光光度计
红外线：波长大于0.76um，小于500um的电磁波。 Hooke定律来描述分子的伸缩振动。
当分子的振动频率与入射的红外频率相同时，分子对红外产生吸收。伸缩振动和弯曲振动。
基频峰：分子吸收一定频率的红外线，振动能级由基态(V=0)跃迁至第一激发态时产生的吸收峰。
倍频峰：振动能级由基态跃至第二、三激发态。统称泛频峰。
吸收峰：用于鉴别官能团存在的吸收峰称特征吸收峰。
指纹区：1250-400cm (8.0-25um)的低频区称为指纹区。
红外分光光度计主要部件：光源、吸收池、单色器(棱镜和光栅)和检测器(真空热电偶)及记录装置。
第七章 色谱法
第一节 概述
色谱法：是一种物理或物理化学分离方法。用于定性鉴别、纯度检查、含量测定。
分配系数：组分在固定相和流动相之间的分配平衡时的浓度之比。 K=
容量因子：又称质量分配系数，即达到分配平衡后，组分在固定相和流动相中的质量之比。
第二节 薄层分析法
一般指吸附薄层色谱法，固定相为吸附剂的薄层吸附法。K值越大随展开剂移动的速度越慢。
比移徝：在薄层色谱法中，组分的迁移距离( )与展开剂的迁移距离( )之比称为比移值( ) 。
R 最佳范围是0.3-0.5 ，可用范围是0.2-0.8 。
吸附剂：吸附薄层色谱法的固定相。常用吸附剂有：硅胶、氧化铝、硅藻土、纤维素和聚酰胺。
硅胶：在105-110 C加热30分，使硅胶吸附力增加，称为活化。具微酸性，适分离酸性中性物质。
氧化铝：碱性、中性、酸性。中性用得多。 医.学全.在.线www.lindalemus.com
制备薄层板：要求吸附剂涂布均匀表面光滑，使用前检查均匀度。2000版用机械涂布法。活化。
吸附剂与展开剂的选择：分离极性较强的组分时，宜选用活性低(活度级别高)的薄层板，以极性强的展开剂展开。反之
点样：体积宜在20ul 以下，样径不超过2-3mm ，点间距离为1.5-2.0cm，距底2.0cm 。
显色方法：直接喷雾法、浸渍法、压板法。
定性分析方法、纯度检查、定量分析方法(洗脱测定法和直接测定法)。
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