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直接进样(direct injection)是近几年发展起来的一种样品不需要经过预处理或只经简单的处理后直接注入色谱中进行分析.
在用HPLC进行体液中药物分析或生物样品分析时常需进行预处理,因为:1.为了使样品的物理状态适用于色谱柱.2.使带测组分得到富集以达到仪器的灵敏度.
当组分样品同时含有大量蛋白质或其他内源性杂支时,预处理的方法比较复杂繁琐.因此近年来在直接进样方面有了很大的发展,目的就是为了解决这类问题.主要集中于直接进样用固定相,柱切换技术及胶束色谱等方面.
下面简单的介绍这三方面:
1. 直接进样用固定相
直接进样用固定相有如下特点.
(1)在一定条件下固定相对蛋白质不保留或几近不保留,而被测组分能够被保留在柱上进行分离.
(2)当被测组分的K落在合理的范围内时于固定相匹配的流动相中有机改性剂的溶度保持在低水平上,即固定相对被测组分的保留不能太强,避免由于流动相中有机改性剂的比例增加使蛋白质沉积在柱上.固定相具有以上的特征主要是利用小孔径硅胶对蛋白质的排阻性质和对硅胶基体表面进行适当的改性来实现的.例如当蛋白质的直径大于硅胶孔径时,蛋白质分子就完全被排阻于填料孔径之外.因此为了使蛋白质不保留或几近不保留需对硅胶进行改性. 医.学.全.在.线www.med126.com
改性后的硅胶可以分为两类(1)硅胶内外具有不同的键合基团内表面亲水,不吸附蛋白质,内表面疏水保留药物.(2)硅胶的内外表面具有相同的组成,都键合有亲水疏水的基团,其作用是首先引入亲水基团调节外表面的疏水性,使蛋白质不沉积在外表面,但同时存在疏水基,外表面仍吸附部分蛋白质.但当饱和时就不在吸附了,其次被测组分进入填料的空隙中,于混合基团的疏水基作用,保留在固定相中.
目前主要应用的直接分析用固定相有以下几种:
(a) 屏蔽疏水固定相（SHP）
SHP的硅胶上键合有亲水性聚氧化乙烯的网状结构，内有疏水性的苯基。小分子可以通过网状结构，大分子则被屏蔽在柱填料间隙处被洗脱。此固定相具有稳定性好重现性好的特点，经过1000次含有甲氧苄啶的血清直接进样，色谱柱性能无较太大改变。
(b) 混合功能基固定相（MEP）
是指在多孔硅胶表面上同时键合有疏水和清水两种基团的固定相。特点是对于亲水性和疏水性的药物均适用。可用于血清中极性较大的和非极性的药物直接进样分析，用这种固定相已成功的分析了血样中的苯巴比妥、苯妥英、卡马西平等抗癫痫药的分析。
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