一)根据物质溶解度差别进行分离
（1)结晶及重结晶方法
判断结晶纯度的方法有：
a.晶型均一，色泽均匀医。学教育网原创。
b.有一定的熔点和较小的溶距，熔距应在2℃以内。
c.TLC或PC分别用三种以上溶剂系统检识，呈现单一圆整斑点。
d.HPLC或GC检查呈现单峰。 www.med126.com
（2)沉淀法
水提醇沉法（除去多糖或蛋白质)
醇提水沉法（除去树脂或叶绿素)
醇提乙醚沉淀或丙酮沉淀法（使皂甙沉淀析出)
（3)pH法
酸提碱沉法（使生物碱类成分沉淀)
碱提酸沉法（使黄酮、蒽醌等成分沉淀)
等电点法（使蛋白质沉淀)
（4)盐类沉淀法：
（二)根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行分离
1.液-液萃取与分配系数K值
2.分离难易与分离因子β
3.分配比与pH
4.纸色谱
5.分配柱色谱
（三)根据物质的吸附性差别进行分离
1.物理吸附基本规律—相似者易于吸附
（1)对极性物质具有较强的亲和能力。故极性强的溶质将被优先吸附。
（2)溶剂极性越弱，则吸附剂对溶质的吸附能力越强。溶剂极性增强，则吸附剂对溶质的吸附能力减弱。
（3)溶质即使被硅胶、氧化铝吸附，但加入极性较强的溶剂时，又可被后者置换洗脱出来。
活性炭因为是非极性吸附剂，故与硅胶、氧化铝相反。
2.极性及其强弱判断
（1)官能团的极性强弱按下列表达顺序排列：
RCOOH ＞ Ar-OH ＞＞、RNHR ＞ RC=O ＞ R-O-R ＞ RH（2)化合物的极性由分子中所含官能团决定。
3.吸附色谱法应用
（1)硅胶、氧化铝吸附柱色谱过程中，吸附剂的用量一般为样品量的30-60倍。样品极性较小、难以分离者，吸附剂用量可适当提高至样品量的100-200倍。
（2)硅胶、氧化铝吸附柱色谱，应尽可能选用极性小的溶剂装柱和溶解样品，以利于样品在吸附剂柱上形成狭窄的原始谱带。 医学全.在线.网.站.提供
（3)洗脱所用溶剂的极性宜逐步增加。
（4)为避免发生化学吸附，酸性物质宜用硅胶，碱性物质则宜用氧化铝进行分离。
4.聚酰胺吸附色谱法
（1)聚酰胺的性质及吸附原理
① 形成氢键的基团数目越多，吸附能力越强。
② 成键位置对吸附力也有影响。易形成分于内氢键者，其在聚酰胺上的吸附相对减弱。
③ 分子中芳香化程度高者，则吸附性增强；反之，则减弱。
一般情况下，各种溶剂在聚酸胺柱上的洗脱能力由弱至强，可大致排列成下列顺序；水→甲醇→丙酮→氢氧化钠水溶液→甲酰胺→二甲基甲酰胺→尿素水溶液
（2)聚酰胺色谱的应用
5.大孔吸附树脂
（1)大孔吸附树脂的吸附原理
大孔吸附树脂是吸附性和分子筛性原理相结合的分子材料。吸附性是由于范德华引力或产生氢键的结果，分子筛性是由于其本身多孔性结构所决定的。
（2)影响吸附的因素
大孔吸附树脂本身的性质、溶剂的性质和化合物的性质是影响吸附的3个重要因素。
（3)大孔吸附树脂的应用
苷与糖类的分离，生物碱的精制，多糖、黄酮、三萜类化合物的分离。
（4)洗脱液的选择
洗脱液可使用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等。
（四)根据物质分子大小进行分离
物质分子大小不同的化合物可用透析法、凝胶过滤法、超滤法、超速离心法等分离。
1.凝胶过滤法
凝胶的种类：常用的有葡聚糖凝胶（Sepadex-G)医.学.全.在线.网.站.提供以及羟丙基葡聚糖凝胶（Sephadex-LH-20)。
2.膜过滤法
膜过滤法主要包括渗透、反渗透、超滤、电渗析、透析、液膜技术等。透析法多用于水溶性的大分子和小分子物质的分离，如蛋白质、酶、多糖分离过程中的脱盐。按照孔径大小，可将透析膜分为：微滤膜、超滤膜、反渗透膜、纳米膜。
（五)根据物质解离程度不同进行分离
离子交换树脂的种类：阳离子（强酸型和弱酸型)交换树脂和阴离子（强碱型和弱碱型)交换树脂。
