二、紫外及可见光谱在黄酮类化合物鉴别中的应用
1.测定样品在甲醇溶液中的UV光谱。
2.测定样品在甲醇溶液中加入各种诊断试剂后得到的UV及可见光谱。常用的诊断试剂有甲醇钠(NaOMe)、乙酸钠(NaOAc)、乙酸钠-硼酸(NaOAc-H3B03)、三氯化铝(AlCl3)及三氯化铝-盐酸(AlCl3-HCl)等。
3.如样品为苷类，则可先进行水解，或甲基化后再水解，并测定苷元或其衍生物的UV光谱。各种诊断试剂的详细配制方法及测定程序可参看有关文献。
(一)黄酮类化合物在甲醇溶液中的UV光谱特征
黄酮、黄酮醇等多数黄酮类化合物，因分子中存在如下所示的桂皮酰基及苯甲酰基组成的交叉共轭体系，故其甲醇溶液在200～400nm的区域内存在两个主要的紫外吸收带，称为峰带Ⅰ(300～400nm)及峰带Ⅱ(220～280nm)。
1.黄酮及黄酮醇类
两者UV光谱谱形相似，但带Ⅰ位置不同，可据此进行分类：黄酮带Ⅰ<350nm，黄酮醇带Ⅰ>350nm。
2.查耳酮及橙酮类
共同特征是带Ⅰ很强，为主峰;而带Ⅱ则较弱，为次强峰。
3.异黄酮、二氢黄酮及二氢黄酮醇
这三类化合物中，除有由A环苯甲酰系统引起的带Ⅱ吸收(主峰)外，因B环不与吡喃酮环上的羰基共轭(或共轭很弱)，故带Ⅰ很弱，常在主峰的长波方向处有一肩峰。
根据主峰的位置，可以区别异黄酮与二氢黄酮及二氢黄酮醇类。前者在245～270nm，后两者在270～295nm。
(二)加入诊断试剂后引起的位移及其在结构测定中的意义
1.加入诊断试剂后黄酮及黄酮醇类化合物的紫外光谱几种主要的诊断试剂引起的位移及其结构特征归属见表6-9。
表6-9 加入诊断试剂的黄酮及黄酮醇类化合物UV图谱及结构特征的归属
三、氢核磁共振在黄酮类化合物结构分析中的应用
(一)A环质子
1.5,7-二羟基黄酮类化合物
其中，H-6及H-8将分别作为二重峰(J=2.5Hz)，出现在δ5.70～6.90区域内，且H-6信号总是比H-8信号位于较高的磁场区。当7-OH成苷时，则H-6及H-8信号均向低磁场方向位移。
2.7-羟基黄酮类化合物
A环上有H-5、H-6、H-8三个芳香质子。
H-5因有C-4位羰基强烈的负屏蔽效应的影响，以及H-6的邻偶作用，将作为一个二重峰(J=Ca. 9.0Hz)出现在δ8.0左右，位于比其他芳香质子较低的磁场。H-6因有H-5邻偶(J=Ca. 9.0Hz)及H-8间偶(J=2.5Hz)的作用，将表现为一个双二重峰。H-8因有H-6的间位偶合作用，故显现为一个裂距较小的二重峰 (J=2.5Hz)。
(二)B环质子
1.4′-氧取化黄酮类化合物
B环质子分为H-3′，H-5′和H-2′，H-6′两组，各以相当于2个氢的双峰信号((J=8.5Hz)出现在δ6.5～7.9区域。H-3′，H-5′的化学位移总是比H-2′，H-6′的化学位移值小。
2.3′，4′-二氧取代黄酮类化合物
H-5′为d峰(J=8.5Hz)，出现在δ6.70～7.10处。H-2′(d，J=2.5Hz)和H-6′(dd，J=8.5、2.5Hz)，出现在δ7.20～7.90范围。
3.3′，4′，5′-三氧取代黄酮类化合物
H-2′及H-6′将作为相当于两上质子的一个单峰，出现在δ6.50～7.50范围内。
(三)C环质子
1.黄酮醇类
因为C环上没有质子，因此没有特征峰。
2.黄酮类
该类化合物的H-3常常作为一个尖锐的单峰信号出现在δ6.30左右。
3.异黄酮类
异黄酮上的H-2，因正好位于羰基的β位，且通过碳与氧相接，故将作为一个单峰出现在比一般芳香质子较低的磁场区(δ7.60～7.80)。
4.二氢黄酮及二氢黄酮醇
(1)二氢黄酮
H-2与两个磁不等同的H-3偶合，故作为一个双二重峰出现，中心位于δ5.20处。两个H-3，因有相互偕偶及H-2的邻偶，将分别作为一个双二重峰出现，中心位于δ2.80处，但两组峰常有相互重叠现象。
(2)二氢黄酮醇
在天然存在的二氢黄酮醇中，H-2及H-3多为反式双直立键，故分别作为一个二重峰出现(J=Ca.11.0Hz)。H-2位于δ4.90前后，H-3则位于δ4.30左右，两者很容易区分，据此还可确定C-2及C-3的相对构型，即两质子互为反式。
(四)糖上的质子
(五)C6-CH3及C8-CH3质子
(六)乙酰氧基的质子
(七)甲氧基上的质子
除若干例外，甲氧基质子信号一般在δ3.50～4.10处出现。
四、碳核磁共振在黄酮类化合物结构研究中的应用
黄酮类化合物13C-NMR信号的归属一般可以通过：①与简单的模型化合物如苯乙酮、桂皮酸以及它们的衍生物的图谱进行比较医学全.在.线.提供. www.lindalemus.com;②用经验性的简单芳香化合物的取代基位移加和规律进行计算等方法加以解析。
B型题：
A.山奈酚
B.芹菜素
C.大豆素
D.二氢山奈酚
E.二氢芹菜素
1：1H-NMR谱中母核质子出现在最低场(化学位移7.82单峰)的是
[答疑编号111060201]
『正确答案』C
2：1H-NMR谱中母核质子有三组四重峰，偶合常数分别为11Hz，5Hz，17Hz，该化合物是
[答疑编号111060202]
『正确答案』E
3：1H-NMR谱中母核质子有一对双重峰，偶合常数等于11Hz，该化合物是
[答疑编号111060203]
『正确答案』D
4：1H-NMR谱中可以见到6.49的单峰，该化合物是
[答疑编号111060204]
『正确答案』B
5：1H-NMR谱中没有C环的质子信号，该化合物是
[答疑编号111060205]
『正确答案』A
第五节 含黄酮类化合物的中药实例
一、黄芩
从中分离出来的黄酮类化合物有黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素。其中黄芩苷是主要有效成分，具有抗菌、消炎作用。此外，还有降转氨酶的作用。黄芩苷的苷元是黄芩素，黄芩素的磷酸酯钠盐可用于治疗过敏、喘息等疾病。
黄芩苷三个最主要的结构特征。
1.它是黄酮类化合物，三位是没有羟基的，是一个黄酮类成分。
2.在A环上有邻二酚羟基取代。
3.它是一个葡萄糖醛酸苷。
黄芩苷几乎不溶于水，难溶于甲醇、乙醇、丙酮，可溶于热乙酸。遇三氯化铁显绿色，遇乙酸铅生成橙红色沉淀。溶于碱及氨水中初显黄色，不久则变为黑棕色。黄芩苷可用水煎煮加酸沉淀的办法提取。
二、葛根
葛根主要含异黄酮类化合物，主要成分有大豆素、大豆苷、葛根素。大豆素属于苷元，大豆苷和葛根素都属于苷。大豆苷和葛根素都属于苷，大豆苷和葛根素的苷元是相同的，都是大豆素。大豆苷和葛根素虽然都是大豆素的苷，但所形成的苷是不一样的。大豆苷是一个氧苷，而葛根素是一个碳苷。
葛根总异黄酮有增加冠状动脉血流量及降低心肌耗氧量等作用。大豆素、大豆苷、葛根素他们既没有三羟基也没有五羟基，分子结构中也没有邻二酚羟基，因此，在分离葛根总黄酮时就可以用氧化铝柱色谱法分离。
三、银杏叶
银杏叶中所含的黄酮结构类型比较多，包括黄酮、黄酮醇及其苷类，也包括儿茶素类和双黄酮类。其中最典型的是含有双黄酮类化合物，银杏叶中的黄酮类化合物有扩张冠状血管和增加脑血流量的作用。
四、槐米
槐米里含有的有效成分是芦丁。它的苷元是槲皮素，可用于治疗毛细血管变脆引起的出血症，并用作高血压的辅助治疗剂。
芦丁和槲皮素是一组非常重要的黄酮类化合物。从结构类型上讲属于黄酮醇类芦丁分子中因含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露在空气中能缓缓变为暗褐色，在碱性条件下更容易被氧化分解。芦丁在水当中的溶解度与温度有很大关系，冷水里溶解度极差，而热水里溶解度又很高，因此，在从槐米里提取芦丁时主要就是利用了这一性质选择水煎或碱水提取的办法。但在碱性条件下，芦丁分子结构中有因为有邻二酚羟基很容易发生结构的变化，所以在用碱水提取时要加少量的硼砂进去，因为硼砂能达到保护邻二酚羟基的目的。
五、陈皮
陈皮的主要成分是橙皮苷，结构类型属于二氢黄酮，橙皮苷具有和芦丁相同的用途。橙皮苷几乎不溶于冷水，在乙醇或热水中溶解度较大，可溶于吡啶、甘油和乙酸。在中药陈皮里提取橙皮苷时也能选择碱提酸沉的办法。
六、满山红
满山红中主要含有杜鹃素。从结构类型上讲杜鹃素也属于二氢黄酮。杜鹃素是祛痰成分，临床用于治疗慢性支气管炎。杜鹃素与盐酸-镁粉反应呈粉红色，加热后变为玫瑰红色，与FeCl3反应呈草绿色。
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